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在我們進行重組蛋白(bái)表達時(shí)，很(hěn)多時(shí)候沒辦法一次性成功，往往會(huì)遇到(dào)各種各樣的問題。比如，重組蛋白(bái)純化後沉澱的情況，一般來(lái)說，蛋白(bái)都會(huì)懸浮在溶液中，爲什(shén)麽會(huì)出現(xiàn)沉澱的情況呢(ne)?今天普健生物就蛋白(bái)純化後沉澱的現(xiàn)象和(hé)大(dà)家具體分析分析。
其實就發生情況來(lái)說，在鎳離子親和(hé)純化蛋白(bái)時(shí)，蛋白(bái)沉澱的現(xiàn)象發生最多，主要原因如下(xià)：
1、在純化過程中出現(xiàn)鎳離子脫落的情況，而鎳離子屬于重金(jīn)屬，其會(huì)造成蛋白(bái)凝聚後沉澱的情況;
2、制備的溶液不符合蛋白(bái)的特性。換句話(huà)說，我們配置的溶液不達标，使得蛋白(bái)無法更好(hǎo)地溶解于溶液中，自(zì)然會(huì)析出;
3、還是溶液的環境影響，所配置的溶液的PH值裏蛋白(bái)的等電點太過接近，一般這(zhè)個時(shí)候的蛋白(bái)都比較容易出現(xiàn)沉澱情況;
4、溫度因素。在4度的環境下(xià)，蛋白(bái)溶液容易滋生細菌等微生物，長時(shí)間可能(néng)會(huì)造成蛋白(bái)性質變化或降解，最終造成沉澱;
5、反複凍融。多次對(duì)半百進行冰凍和(hé)融化會(huì)造成蛋白(bái)結構的傷害，造成蛋白(bái)不溶;
當然了(le)，重組蛋白(bái)出現(xiàn)沉澱的情況，并不是說蛋白(bái)就失去活性了(le)，通過一定的手段，可以讓蛋白(bái)重新溶解并使用(yòng)。那麽，如何解決蛋白(bái)沉澱的情況呢(ne)?
1、在使用(yòng)鎳柱純化蛋白(bái)的時(shí)候，适當加入一些(xiē)EDTA，通過其消除脫落下(xià)來(lái)的鎳離子，從(cóng)而減少其對(duì)蛋白(bái)的上(shàng)傷害;
2、加入分散劑，減少蛋白(bái)分子之間的碰撞;
3、加入蛋白(bái)保護劑，防止蛋白(bái)的降解;
4、計(jì)算(suàn)出蛋白(bái)的等電點，然後在配置溶液的時(shí)候，盡量避開(kāi)這(zhè)個等電點;
5、控制好(hǎo)溫度，避免蛋白(bái)的熱損;
6、對(duì)于那些(xiē)難以單獨純在的蛋白(bái)，可以添加一些(xiē)輔助蛋白(bái)，讓其維持在一個很(hěn)好(hǎo)的構象内;
7、特殊情況特殊對(duì)待，針對(duì)不同的蛋白(bái)，使用(yòng)不同的保存方法;
總的來(lái)說，我們在進行重組蛋白(bái)制備的時(shí)候，不僅要做好(hǎo)相應的制備方案，蛋白(bái)的保存方案也(yě)需要做好(hǎo)，這(zhè)樣才能(néng)爲客戶提供更好(hǎo)的蛋白(bái)産品。盎然了(le)，随着更多新型蛋白(bái)的出現(xiàn)，其發生沉澱的原因也(yě)會(huì)越來(lái)越多，我們需要根據蛋白(bái)的特性，調整相應的防沉澱措施。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)制備服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
