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昆蟲杆狀病毒表達系統

服務簡介

昆蟲杆狀病毒表達系統 (BEVS) 是一種利用(yòng)杆狀病毒作(zuò)爲外(wài)源基因的載體,通過感染昆蟲細胞或者昆蟲幼蟲來(lái)表達外(wài)源蛋白(bái)的系統,是重要的真核表達系統之一。

1.昆蟲杆狀病毒表達系統的優勢:

a.杆狀病毒安全性好(hǎo)

b.攜帶外(wài)源基因的容量大(dà)

c.外(wài)源目的蛋白(bái)質表達水(shuǐ)平高(gāo)

d.表達的真核基因産品可以進行正确的折疊與修飾,因而具有良好(hǎo)的生物活性。

2.與哺乳細胞相比昆蟲表達系統的優勢:

a.培養條件相對(duì)簡單,不需要CO2

b.不容易被細菌污染

c.能(néng)進行蛋白(bái)翻譯後糖基化修飾

d.大(dà)規模生産條件簡單,更易獲得大(dà)量蛋白(bái)

常見的表達載體及特征

載體 特征
pFastBac1

用(yòng)于高(gāo)水(shuǐ)平蛋白(bái)表達的強AcMNPV多角體基因 (PH)啓動子

用(yòng)于簡化克隆的大(dà)型多克隆站(zhàn)點

pFastBacHT

用(yòng)于高(gāo)水(shuǐ)平蛋白(bái)表達的強多角體(PH)啓動子

用(yòng)于使用(yòng)金(jīn)屬螯合樹脂純化重組融合蛋白(bái)的N端6His标簽,以及用(yòng)于在蛋白(bái)純化後去除6His标簽的TEV蛋白(bái)酶裂解位點

用(yòng)于簡化克隆的三個讀碼框的載體

pFastBacDual

用(yòng)于同時(shí)表達兩種蛋白(bái)的兩個強杆狀病毒啓動子(PH 和(hé) p10)

用(yòng)于簡化克隆的兩個大(dà)型多克隆位點

 

常見的表達細胞及特征

細胞 來(lái)源 用(yòng)途
Sf9 Sf9細胞系克隆分IPLBSF21-AE(Sf21),來(lái)源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織

适于轉染、純化、生産高(gāo)滴度病毒、鋪闆以及表達重組蛋白(bái)

Sf21

Sf21細胞衍生于IPLBSF-21細胞系,也(yě)來(lái)源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織

也(yě)适于轉染、純化、生産高(gāo)滴度病毒、鋪闆以及表達重組蛋白(bái)。在一些(xiē)結構上(shàng)Sf21細胞可能(néng)比Sf9細胞表達蛋白(bái)量高(gāo)

Hi5

Hi5細胞系源于博伊斯湯普森研究所對(duì)植物的研究和(hé)源于白(bái)菜尺蠖卵巢細胞,粉紋夜蛾細胞

Hi5細胞表達重組病毒性能(néng)優越, 經常用(yòng)于轉染和(hé)空(kōng)斑純化,也(yě)适用(yòng)于表達分泌型重組蛋白(bái)

S2

S2是一種果蠅晚期胚胎細胞。其中多爲雌性四倍體細胞,也(yě)有雙倍體細胞

比較适合重組蛋白(bái)的表達

 

服務優勢

1.普健生物利用(yòng)經典Bac-to-Bac技術,打造了(le)一個快(kuài)速簡便高(gāo)效的杆狀病毒表達平台; 該技術能(néng)夠快(kuài)速地産生重組病毒,而且不需要繁瑣的空(kōng)斑分析,大(dà)大(dà)提高(gāo)了(le)效率。

2.蛋白(bái)生産的周期短,通量大(dà)。可以實現(xiàn)細胞從(cóng)小(xiǎo)規模培養到(dào)大(dà)規模發酵的過程,使得蛋白(bái)産物甚至可以達到(dào)100mg/L的級别。

3.提供免費的病毒粒子擴增和(hé)儲存服務,儲存期長達2年。

服務内容

服務項目

客戶提供

服務内容

服務周期

交付内容

昆蟲杆狀病毒表達蛋白(bái)

基因序列

載體

基因合成及密碼子優化

載體構建

病毒包裝及擴增

表達純化測試

放(fàng)大(dà)生産及純化

服務報(bào)告

6-8 周

蛋白(bái)樣品

技術服務報(bào)告

案例展示

案例1 昆蟲-杆狀病毒系統表達大(dà)蛋白(bái)A(272 KD)

  普健采用(yòng)昆蟲-杆狀病毒表達系統,C端融合6*His标簽表達了(le)大(dà)小(xiǎo)爲272 KD的蛋白(bái)A,經過P1代表達測試,病毒擴增後分别轉染Sf細胞和(hé)Tn細胞測定MOI,選取最佳表達條件進行P2代表達測試和(hé)200ml表達純化,最終得到(dào)的蛋白(bái)A純度90%,産量5mg/L。

圖1 蛋白(bái)A P1代表達純化測試結果( 還原SDS-PAGE )
A.考馬斯亮(liàng)藍染色. B. WB (ECL發光,抗His标簽抗體).
ø.陰性對(duì)照培養基. 1 和(hé) 2.轉染的 1和(hé)2号克隆. Medium:培養基. NPE. 可溶上(shàng)清. DPE. 沉澱. +. 陽性對(duì)照.

 

圖2.蛋白(bái)A 在Sf 和(hé) Tn 細胞中的P2 代表達測試(還原 SDS-PAGE).
考馬斯亮(liàng)藍染色 Ø.陰性對(duì)照. D2-D3. 轉染後天數. +. 陽性對(duì)照.

 

圖3.蛋白(bái)A 在Sf 和(hé) Tn 細胞中的P2 代表達測試情況-WB驗證(還原 SDS-PAGE ).
Ø.陰性對(duì)照. D2-D3. 轉染後天數. +. 陽性對(duì)照.

 

圖4.蛋白(bái)A純化質檢圖(還原 SDS-PAGE )
A.考馬斯亮(liàng)藍染色. B. WB (ECL發光;抗His标簽抗體). MW. 分子量标記.

 

案例2 昆蟲-杆狀病毒系統表達G蛋白(bái)偶聯受體(蛋白(bái)B)

  普健生物采用(yòng)昆蟲-杆狀病毒表達系統,N端融合10*His和(hé)Flag标簽表達了(le)大(dà)小(xiǎo)爲42 KD的G蛋白(bái)偶聯受體-蛋白(bái)B(7次跨膜區(qū),2個糖基化位點),經過P1代表達測試,病毒擴增後分别轉染Sf細胞和(hé)Tn細胞測定MOI,選取最佳表達條件進行P2代表達測試和(hé)200 ml表達純化,最終得到(dào)的蛋白(bái)B用(yòng)biacore測定了(le)跟配體的親和(hé)力,親和(hé)力在uM級。

圖1.蛋白(bái)B P2代表達純化測試(Sf和(hé)Tn細胞).
還原SDS-PAGE及考馬斯藍染色.
Ø.陰性對(duì)照.D2-D3.感染後天數.
Medium:培養基.NPE.可溶性上(shàng)清.DPE.沉澱.

 

圖2 P2代表達測試WB驗證(Sf和(hé)Tn細胞;ECL發光法;抗His标簽抗體).
Ø.陰性對(duì)照. D2-D3.感染後天數.+.陽性對(duì)照.Medium:培養基.NPE.可溶性上(shàng)清.DPE.沉澱.

 

圖3 蛋白(bái)B純化質檢圖(還原SDS-PAGE;考馬斯藍染色)
MW.分子量标記.

 

圖4. 蛋白(bái)B跟配體親和(hé)力測定結果