噬菌體展示技術抗體發現(xiàn)平台

噬菌體展示抗體技術将基因型和(hé)表型統一于一體，将選擇能(néng)力與擴增能(néng)力結合起來(lái)，具有強大(dà)的篩選能(néng)力，能(néng)夠在體外(wài)模拟體内的抗體生成過程，可以不經雜(zá)交瘤途徑，甚至不經過免疫就可以制備和(hé)生産單克隆抗體。

噬菌體展示技術的出現(xiàn)爲全人重組抗體提供了(le)一條簡便、快(kuài)捷的基因工(gōng)程抗體制備路線，是全人重組抗體制備發展史上(shàng)重要的轉折點。

近年來(lái)，單域抗體(SdAb)的關注度也(yě)非常高(gāo)，單域抗體爲駝類和(hé)軟骨魚類中天然存在的僅由兩條重鏈組成的特殊抗體，隻包含一個重鏈可變區(qū)(VHH, Variable Domain of Heavy Chain Antibody)和(hé)兩個常規的CH2與CH3區(qū)。單域抗體通過重鏈上(shàng)的一個可變區(qū)(VHH)結合抗原，該可變區(qū)可以單獨穩定地在體外(wài)存在，被稱爲駝類單域抗體(SdAb)或者納米抗體(nanobody)。納米抗體晶體寬爲2.5nm，長4nm，分子量僅爲傳統完整抗體的1/10(約15kD)但(dàn)依然具有完整的抗原識别能(néng)力，得益于納米抗體微小(xiǎo)的結構、完整的抗原識别能(néng)力以及噬菌體篩選技術，納米抗體表現(xiàn)出高(gāo)親和(hé)力、高(gāo)特異性、強穿透性和(hé)易于改造和(hé)表達等特點，并且由于可以獲得抗體完整序列，納米抗體可以通過體外(wài)重組表達高(gāo)質量穩定生産，有效避免傳統抗體的批次間差異問題。

納米抗體特點

1.有更長的CDR3區(qū)(納米抗體CDR3通常由16~24個氨基酸組成，傳統單抗CDR3僅有7~12個氨基酸 )，與抗原特異性結合能(néng)力更強

2.結構簡單，易于基因工(gōng)程改造

3.制備簡單，易于工(gōng)業化放(fàng)大(dà)生産

4.易于人源化

噬菌體抗體庫的分類

抗體庫是編碼特性未知(zhī)抗體的抗體基因的巨大(dà)集合(通常大(dà)于10¹⁰)。抗體庫是通過噬菌體展示和(hé)其他(tā)體外(wài)選擇技術來(lái)發現(xiàn)抗體的重要來(lái)源，其設計(jì)是成功發現(xiàn)抗體的關鍵。

随機肽庫：将化學合成的随機寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白(bái)基因融合，在噬菌體表面表達出各種氨基酸組合的随機序列短肽。利用(yòng)噬菌體展示随機肽庫可以高(gāo)通量篩選各種抗原的抗原表位

免疫庫：免疫庫由經過免疫 ( 包括疫苗注射、微生物感染、自(zì)身免疫疾病、腫瘤等 ) 後的供體B淋巴細胞的抗體基因構建。對(duì)于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高(gāo)，但(dàn)一般僅适用(yòng)于一種特異性抗體的選擇，庫容量要求不高(gāo)，一般10⁶-10⁸的庫容量就可滿足需要

天然庫：采用(yòng)不經免疫的人或動物來(lái)源的外(wài)周血淋巴細胞、骨髓、脾細胞的B細胞作(zuò)爲材料，進行基因擴增，但(dàn)親和(hé)力通常較低(dī)。骨髓内和(hé)骨髓外(wài)所有抗體基因都包含在内，所構建的抗體庫适用(yòng)于所有抗原所對(duì)應的抗體的選擇，庫容量要求較高(gāo)，最小(xiǎo)需要達到(dào)10⁹，因爲目前估算(suàn)的自(zì)然界的抗原種類在這(zhè)個數量級上(shàng)

1.豐富的噬菌體抗體技術經驗，5年以上(shàng)噬菌體抗體開(kāi)發，交付上(shàng)百個噬菌體展示抗體開(kāi)發項目

2.具有全人源重組抗體庫，庫容高(gāo)達千億級别(10¹¹ pfu)，兩步建庫法，保證了(le)文(wén)庫的多樣性，抗體庫片段插入正确率高(gāo);可以兩周拿到(dào)全人源重組抗體

3.可以構建多物種(人源、小(xiǎo)鼠、兔子、羊駝等)抗體文(wén)庫

4.可以構建多種類型(scfv、Fab、VHH 等)的抗體文(wén)庫

服務流程

根據文(wén)庫中數百個随機抗體序列分析，其CDR3長度基本符合正态分布，跟文(wén)獻中報(bào)道(dào)的自(zì)然VHH抗體CDR3長度分布相符。

挑選背景值較低(dī)的抗體蛋白(bái)進行親和(hé)力測定，結果如下(xià)：