穩定細胞系構建

細胞轉染，是将外(wài)源分子(如 DNA,RNA 等)導入真核細胞中的一種技術;

轉染分爲：瞬時(shí)轉染和(hé)穩定轉染

瞬時(shí)轉染：指外(wài)源 DNA 或 RNA 轉入宿主細胞後不整合到(dào)宿主染色體中進行外(wài)源目的基因的表達

穩定轉染：指外(wài)源 DNA 轉入宿主細胞後将外(wài)源目的基因整合到(dào)宿主染色體中進行表達

穩定轉染的特點：

1. 目的基因整合到(dào)染色體上(shàng)，需要使用(yòng)線性 DNA(線性 DNA 雖然比超螺旋狀的 DNA 轉入量低(dī)，但(dàn)整合率高(gāo))

2. 外(wài)源 DNA 整合到(dào)宿主細胞染色體中大(dà)約爲 1%，通常需要通過一些(xiē)選擇性标記反複篩選，才能(néng)得到(dào)穩定轉染的同源細胞系

3. 随宿主細胞基因組複制、轉錄、翻譯，并被穩定遺傳

4. 用(yòng)于獲得穩定表達的外(wài)源基因的單細胞克隆：如大(dà)規模蛋白(bái)質的合成，長期的藥理(lǐ)學研究遺傳機制的研究等

穩定細胞株：一般是将外(wài)源 DNA 克隆到(dào)具有某種抗性或者選擇基因的載體上(shàng)，載體被轉染到(dào)宿主細胞并整合到(dào)染色體中，用(yòng)載體中所含的選擇标志進行篩選，篩選得到(dào)可穩定表達目的蛋白(bái)的細胞株

穩定細胞株構建流程

高(gāo)質：外(wài)源基因嚴格鑒定，細胞來(lái)源清晰，無污染

高(gāo)産：重組蛋白(bái) / 抗體表達量可快(kuài)速優化至 2g/L 以上(shàng)穩定表達

穩定：獨有的 GS 穩轉系列載體配合 MSX 藥物篩選，實現(xiàn)穩定傳代 15 代以上(shàng)

快(kuài)速：篩選高(gāo)産細胞株，周期短至 3 個月

靈活定制：可針對(duì)重組蛋白(bái) / 抗體全長或片段進行個性化表達

經驗豐富：專業的技術團隊，已成功爲國内外(wài)多家醫(yī)藥公司和(hé)研究單位構建交付穩定細胞株

多篩選系統：G418/ 潮黴素 / 嘌呤黴素篩選系統，GS/DHFR 雙基因篩選系統等

構建生産重組抗體的CHO穩定細胞株