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蛋白(bái)純化之前我們都需要優先對(duì)其進行提取和(hé)分離，這(zhè)樣能(néng)夠極大(dà)減少我們純化的過程，而且能(néng)讓純化的效果更好(hǎo)。那麽，所謂的蛋白(bái)提取和(hé)分離是具體操作(zuò)的呢(ne)?今天，普健生物就在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家具體降解。
對(duì)于固态樣品材料我們采用(yòng)先提取後分離的方式，對(duì)于微生物發酵或動植物細胞培養所得的懸浮液則會(huì)因爲細胞内和(hé)細胞外(wài)的情況而方法不同。
細胞内：需要先破碎細胞，并且在細胞破碎的過程中加入蛋白(bái)抑制酶，以防止細胞内蛋白(bái)的降解。同時(shí)盡量保持在低(dī)溫情況下(xià)操作(zuò);
細胞外(wài)：因爲蛋白(bái)存在于懸浮液中，我們隻需要對(duì)其進行離心、過濾等過程就能(néng)進行固液分離，去除其他(tā)顆粒物質;
爲了(le)保證提取出更多目的蛋白(bái)，并減少其活性确實，我們常常采用(yòng)各種水(shuǐ)溶液來(lái)輔助分離，通常在偏離蛋白(bái)等電點0.5ph單位以上(shàng)時(shí)，能(néng)更大(dà)程度上(shàng)提升蛋白(bái)的溶解度。
1、對(duì)于等電點在堿性範圍内的蛋白(bái)，我們可以考慮加入稀酸;
2、對(duì)于等電點在酸性範圍内的蛋白(bái)，可以用(yòng)稀酸提取(這(zhè)樣有助于提升蛋白(bái)在提取液中的溶解度);
當然了(le)，在加入稀酸的過程中，我們也(yě)要注意提取液的PH值，一定要保證過期在蛋白(bái)穩定的範圍内。
在細胞破碎後進行的蛋白(bái)提取，因爲大(dà)部分的目的蛋白(bái)在懸浮液中，爲了(le)減少損失，我們需要使用(yòng)到(dào)力量的緩沖液。
對(duì)于動物組織來(lái)說，使用(yòng)的緩沖液爲動物組織的2-2.5倍;
對(duì)于植物細胞來(lái)說，隻需要使用(yòng)少量的緩沖液即可;
當然了(le)，細節方面的操作(zuò)也(yě)很(hěn)多，而且在通過離心、沉澱等一系列的過程後，蛋白(bái)的純度有了(le)一定的提升，但(dàn)是還是達不到(dào)我們使用(yòng)的要求。這(zhè)個時(shí)候，我們就需要對(duì)蛋白(bái)進行進一步的純化工(gōng)作(zuò)，通過一系列的純化手段，才能(néng)得到(dào)适宜濃度的蛋白(bái)産品。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供蛋白(bái)純化服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
