近年來(lái),基于基因工(gōng)程原理(lǐ)發展起來(lái)的報(bào)告基因技術逐漸成爲最具有發展潛力基因分析工(gōng)具之一。
報(bào)告基因
報(bào)告基因是一類編碼可供檢測的酶與蛋白(bái)的基因,是現(xiàn)代分子生物學研究領域中用(yòng)于分析基因轉錄和(hé)調控的一種便捷工(gōng)具,可用(yòng)來(lái)分析結構基因旁側區(qū)域潛在的順式元件(如啓動子、增強子和(hé)沉默子等)和(hé)反式作(zuò)用(yòng)因子間的相互作(zuò)用(yòng)關系。
啓動子是真核基因轉錄起始位點上(shàng)遊一段長度不等的特異性序列,該片段有多種調節因子的結合位點,能(néng)順式調控基因的轉錄,因此可以通過檢測啓動子的激活程度間接定量蛋白(bái)(如Ⅰ型幹擾素)的表達量。
作(zuò)爲報(bào)告基因的條件:
編碼産物的活性不受宿主細胞的幹預;
編碼産物在宿主細胞本身不存在,易區(qū)分;
編碼産物的活性測定必須快(kuài)速、簡便、靈敏度高(gāo)、重複性好(hǎo)。
常用(yòng)的報(bào)告基因:
氯黴素乙酰轉移酶基因(CAT)、β-gal、熒光素酶基因(Luc)
報(bào)告基因的應用(yòng):
探讨啓動子作(zuò)用(yòng),細胞信号轉導,基因轉錄調節,作(zuò)爲分子标記,生物大(dà)分子間的相互作(zuò)用(yòng),RNA幹擾研究,影像技術,藥物篩選等
在如今發展起來(lái)的衆多報(bào)告基因中,熒光素酶報(bào)告基因以檢測快(kuài)速、靈敏度高(gāo)、線性範圍廣,且在大(dà)多數哺乳動物細胞無内源性表達等諸多優點而備受青睐。
雙熒光素酶報(bào)告基因系統
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統采用(yòng)螢火蟲熒光素酶(Firefly Luciferase)和(hé)海腎熒光素酶(Rellina Luciferase)組成雙熒光素酶報(bào)告基因實驗系統(Dual-Luciferase Reporter Assay),可以較好(hǎo)地體現(xiàn)檢測結果的精确性。
實驗中螢火蟲熒光素酶與基因表達的特定實驗條件相關,海腎熒光素酶用(yòng)來(lái)做轉染的内參,以校正不同樣品之間轉染的轉染效率。螢火蟲熒光素酶和(hé)海腎熒光素酶不需要翻譯後修飾即具有生物活性,一旦翻譯完成即具有報(bào)告基因的功能(néng)。通過加入特定的熒光素酶底物,熒光素酶與底物反應過程中會(huì)發出生物熒光,然後可以通過熒光測定儀測定反應過程中釋放(fàng)的生物熒光。
與傳統的共報(bào)告基因(如 CAT,β-Gal,GUS)相比,雙熒光素酶報(bào)告基因系統更加靈敏,有望把可能(néng)削弱實驗準确性的内在因素(如培養細胞的數目和(hé)健康狀況的差别、細胞轉染和(hé)裂解效率的差别等)的變化降到(dào)最小(xiǎo),而且報(bào)告基因的檢測極爲快(kuài)速(30s内完成測試)、簡便。
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測設計(jì)圖及原理(lǐ)圖示
普健生物雙熒光素酶報(bào)告基因檢測服務
1. 序列分析。
2. 相關載體亞克隆。
3. 細胞培養及報(bào)告基因質粒、轉錄因子的共轉染。
4. 熒光素酶活性檢測。
5. 實驗報(bào)告。
客戶提交樣本要求:
客戶可以提供構建好(hǎo)的含目的調控元件的報(bào)告基因質粒,并提供報(bào)告基因質粒的全部相關信息。也(yě)可以提供目的調控元件序列及相關信息,由普健生物将其克隆到(dào)相應的報(bào)告基因質粒上(shàng)。
普健生物的優勢:
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擁有長期的報(bào)告基因實驗分析經驗,幫助你(nǐ)合理(lǐ)設計(jì)實驗;
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高(gāo)效轉染試劑、高(gāo)靈敏度熒光素酶檢測試劑盒,确保結果的可靠性;
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全面的技術服務,提供詳細的原始數據和(hé)實驗報(bào)告。