經典案例|普健生物昆蟲杆狀病毒表達系統

重組蛋白(bái)表達系列五

昆蟲杆狀病毒表達系統

展示案例：Baculovirus / Insect Cells expression system

昆蟲細胞與哺乳動物細胞翻譯和(hé)翻譯後蛋白(bái)修飾的模式與能(néng)力相似，表達的重組蛋白(bái)與天然蛋白(bái)相似且具有完整的生物活性，細胞懸浮生長，容易實現(xiàn)大(dà)規模低(dī)成本生産；杆狀病毒能(néng)容納大(dà)分子的插入片段，易于表達異源多聚體蛋白(bái)。由于其不具有任何對(duì)哺乳動物有潛在緻病性的動物病毒片段，昆蟲杆狀病毒表達系統問世以來(lái)，獲得了(le)人們的高(gāo)度重視(shì)。

 

普健生物的杆狀病毒-昆蟲蛋白(bái)表達服務，采用(yòng)經典的Bac-to-Bac表達體系，并加以改進。在表達方式（胞内或分泌）、信号肽選擇、細胞培養方式及細胞選擇（Sf9、Sf21、Hi5）等方面有着豐富的案例經驗，表達成功率高(gāo)達99.9%，同時(shí)可提供高(gāo)達200 L的蛋白(bái)表達純化服務。

 

案例展示

Project Information

Beta-glucosidase（後文(wén)簡寫爲BetaGluc1）是纖維素分解酶系中的重要組成成分，能(néng)夠水(shuǐ)解結合于末端非還原性的β-D-葡萄糖鍵，同時(shí)釋放(fàng)出β-D-葡萄糖和(hé)相應的配基，參與生物糖代謝(xiè)，對(duì)維持生物正常生理(lǐ)功能(néng)其重要作(zuò)用(yòng)。

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BetaGluc1采用(yòng)普健杆狀病毒-昆蟲表達系統成功可溶表達，産量高(gāo)達234.2mg/L，純度>95%，經檢驗活性較高(gāo)。

 

以圖爲鑒

Test Report

01

Western Blot with ECL. Detection with anti-His antibodies.

BetaGluc1 protein have expressed in sf9 cells, and they have expressed in culture medium. BetaGluc1 clone 4 was picked to generate P2 virus and do MOI test.

 

02

According to the MOI test results, the best expression condition is: BetaGlu1: 150ul, Hi5, in culture medium.

 

03

 

Purification Test

200ml scale-up and purification using High 5 cells. Purification tests results of culture medium are illustrated below.

MW. Molecular weight marker. IN.Input. FT. Flow through. W. Washes. E.Eluted fractions.

 

04

Purification QC

Reducing-PAGE analysis. 2µg of sample loaded. 1.2 are BetaGlu1

 

05

 

Fermentation and Purification

1L scale up purification test

MW. Molecular weight marker. IN. Input. FT. Flow through. W. Washes. E. Eluted fractions.

 

06

Final QC

Reducing-PAGE analysis. 2µg of sample loaded. 1. 2 are BetaGlu1

 

 

普健生物昆蟲杆狀病毒表達服務

表達體系選擇

多種表達載體：胞内表達和(hé)分泌表達載體系列

多種表達細胞：Sf9，Sf21，Hi-5

 

表達及純化測試

高(gāo)效率：優化表達方案，實驗周期短；

P1代病毒生産及表達測試，P2代病毒生産及MOI測試。

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大(dà)規模生産服務

可滿足高(gāo)達200 L的生産規模。

 

一站(zhàn)式服務

基因設計(jì)及優化、蛋白(bái)表達及純化、後續加工(gōng)處理(lǐ)、數據報(bào)告等。

 

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