抗體是由高(gāo)等生命形式的免疫系統中的B細胞制造的蛋白(bái)質,作(zuò)爲一種适應性特征,使身體能(néng)夠處理(lǐ)對(duì)生物體構成威脅的入侵外(wài)來(lái)分子。抗體的自(zì)然功能(néng)涉及它們附着在抗原(屬于入侵的異物)上(shàng),以标記它們被免疫系統破壞。
這(zhè)種附着在特定分子上(shàng)的天生傾向已經确立了(le)它們在科學研究中的用(yòng)途。由于可以選擇已知(zhī)會(huì)附着在某些(xiē)抗原上(shàng)的特異性抗體,因此研究人員可以使用(yòng)抗體來(lái)識别某些(xiē)物質的存在。因此,在細胞蛋白(bái)質功能(néng)的研究中,抗體的使用(yòng)變得非常依賴。
科學家們已經開(kāi)發出許多利用(yòng)抗體性質來(lái)研究細胞和(hé)組織中蛋白(bái)質的技術。免疫組織化學、免疫細胞化學、蛋白(bái)質印迹、ELISA、流式細胞術和(hé)FACS以及ELISPOT等應用(yòng)都是利用(yòng)抗體的成熟方法。爲了(le)充分利用(yòng)這(zhè)些(xiē)強大(dà)的研究技術,必須選擇适合特定應用(yòng)的正确抗體,因此,爲您的實驗研究選擇合适的抗體是第一步也(yě)是尤爲重要的一步。
免疫組織化學具有低(dī)至中等通量,可用(yòng)于固定細胞和(hé)組織,可以産生細胞定位,具有高(gāo)空(kōng)間分辨率,通常專注于單個蛋白(bái)質,可以一次對(duì)多種蛋白(bái)質進行成像,并且是定性和(hé)半定量的。
研究定位的另一種技術是免疫細胞化學。該技術具有低(dī)到(dào)高(gāo)通量,可用(yòng)于固定細胞和(hé)組織,可以産生亞細胞定位,可以一次對(duì)多種蛋白(bái)質進行成像,并且是定性和(hé)半定量的。然而,其空(kōng)間分辨率受到(dào)組織結構的限制。
蛋白(bái)質印迹是研究蛋白(bái)質濃度的合适技術。它具有低(dī)到(dào)中等通量,可用(yòng)于細胞和(hé)組織裂解物,産生相對(duì)蛋白(bái)質水(shuǐ)平,可以建立分子量,亞型和(hé)翻譯後修飾,并且是半定量的。
ELISA是研究蛋白(bái)質相互作(zuò)用(yòng)的合适技術。該方法具有中到(dào)高(gāo)通量(96孔闆),可用(yòng)于研究血清/血漿,活或固定細胞和(hé)組織,它産生準确的蛋白(bái)質水(shuǐ)平,它是定量和(hé)定性的。
ELISA也(yě)可用(yòng)于研究表達,其特征如上(shàng)所述。流式細胞術和(hé)FACS是研究表達的替代技術。它具有從(cóng)低(dī)到(dào)高(gāo)通量(最多384孔闆)。它可用(yòng)于固定或活細胞,可以确定化學和(hé)物理(lǐ)性質,如大(dà)小(xiǎo)、表面标志物的表達等。它可用(yòng)于定量和(hé)分選細胞(FACS)。最後,它是一種定量方法。
選擇一抗
選擇一抗時(shí),必須考慮正确的類型,單克隆或多克隆。
單克隆抗體僅識别抗原上(shàng)的單個表位,它們産生的背景噪音(yīn)較小(xiǎo),因爲它們不太可能(néng)與其他(tā)蛋白(bái)質發生交叉反應。此外(wài),它們的同質性非常高(gāo),這(zhè)意味着批次之間的變異性很(hěn)低(dī)。它們在與相關分子混合物中的抗原結合方面也(yě)非常有效。然而,由于它們太具體,它們不能(néng)在各種物種中工(gōng)作(zuò)。它們也(yě)容易受到(dào)抗原化學處理(lǐ)的表位丢失的影響。
另一方面,多克隆抗體的特征如下(xià):它們識别任何一種抗原上(shàng)的多個表位,它們具有高(gāo)親和(hé)力,可以幫助放(fàng)大(dà)來(lái)自(zì)低(dī)表達蛋白(bái)的信号,它們更耐受抗原的微小(xiǎo)變化,并且它們可用(yòng)于檢測來(lái)自(zì)免疫原性以外(wài)的物種的蛋白(bái)質。然而,缺點是它們容易出現(xiàn)批次間的差異,并可能(néng)産生背景信号。
選擇二抗
所使用(yòng)的方法類型将告知(zhī)哪種二抗是合适的。
-IHC:HRP或AP偶聯、片段、生物素化(親和(hé)素/鏈黴親和(hé)素與酶或熒光染料偶聯)、熒光染料(如AlexaFluor®、Cy染料、FITC®和(hé)PE)以及預吸附。
-ICC:片段抗體,生物素化(親和(hé)素/鏈黴親和(hé)素與熒光染料偶聯),熒光染料,FITC和(hé)PE,并預吸附。
-蛋白(bái)質印迹:HRP或AP偶聯、生物素化(親和(hé)素/鏈黴親和(hé)素與酶偶聯)、熒光染料(Alexa680和(hé)Alexa790)、輕鏈特異性抗體VeriBlotforIP。
-ELISA和(hé)ELISPOT:HRP或AP偶聯,生物素化(親和(hé)素/鏈黴親和(hé)素與酶偶聯),單克隆(特别是亞型特異性抗體,如抗IgG1)
-流式細胞術和(hé)FACS:熒光染料,Cy染料、FITC®和(hé)PE、生物素化(親和(hé)素/鏈黴親和(hé)素與熒光染料偶聯)、單克隆、F(ab')2片段和(hé)偶聯一抗,可最大(dà)限度地提高(gāo)時(shí)間效率。
普健生物具有完善的基礎檢測實驗服務平台,擁有三大(dà)技術服務平台:分子生物學,細胞生物學,免疫學。分子生物學可以提供載體構建,熒光定量PCR檢測,雙熒光素酶檢測等技術服務。細胞生物學可以細胞培養及轉染,CCK8,MTT,細胞劃痕,transwell,平闆克隆,流式凋亡/周期等檢測。免疫學可以提供包括Westernblot,免疫熒光,免疫組化,Co-IP等檢測。