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自(zì)1975年Kohler和(hé)Milstein首次描述通過雜(zá)交瘤技術産生單克隆抗體(mab)的方法以來(lái)，單克隆抗體已成爲必不可少的研究試劑和(hé)非常成功的治療分子。由于疾病靶标在物種間的高(gāo)序列保守性(使免疫變得困難)、受限的解剖位置(例如中樞神經系統)、難以純化可溶性形式(例如gpcr)以及有時(shí)需要靶向疾病狀态特異性的瞬時(shí)或不穩定構象，因此通過抗體幹預來(lái)調節疾病靶标變得更具挑戰性。
盡管雜(zá)交瘤方法已經徹底改變了(le)單克隆抗體的使用(yòng)，但(dàn)由于依賴于融合事(shì)件，該技術相對(duì)低(dī)效。噬菌體展示技術也(yě)被廣泛用(yòng)作(zuò)生産單克隆抗體的技術。然而，在文(wén)庫構建過程中發生的抗體可變區(qū)基因的随機組合導緻天然同源重鏈和(hé)輕鏈配對(duì)的丢失，而這(zhè)些(xiē)重鏈和(hé)輕鏈配對(duì)是在體内免疫應答(dá)過程中進化和(hé)選擇的。由于這(zhè)種随機配對(duì)，來(lái)自(zì)抗體文(wén)庫的抗體通常需要體外(wài)成熟，以在作(zuò)爲治療分子進展之前賦予增加的親和(hé)力和(hé)穩定性。
近年來(lái)單B細胞技術獲得了(le)許多科學家的青睐，單B細胞技術平台保留了(le)自(zì)然的重鏈和(hé)輕鏈配對(duì)，避免了(le)低(dī)效的雜(zá)交瘤融合步驟，從(cóng)而能(néng)夠有效地挖掘免疫B細胞群。這(zhè)有助于發現(xiàn)罕見的抗體，這(zhè)些(xiē)抗體可能(néng)具有獨特的高(gāo)度理(lǐ)想的特性，以及産生大(dà)量不同的抗體。在克隆抗體基因的過程中，保留天然的重鏈和(hé)輕鏈配對(duì)有利于産生具有吸引力的親和(hé)力、特異性和(hé)穩定性的重組抗體。
流式細胞術已被用(yòng)于從(cóng)免疫、接種疫苗或感染後7天的獻血者血液中分離出單個漿母細胞。在此期間，質母細胞短暫地出現(xiàn)在外(wài)周，并提供豐富的抗原特異性B細胞群供選擇。然而，分選不包括抗原結合步驟，盡管群體豐富，但(dàn)從(cóng)這(zhè)些(xiē)漿質母細胞中回收抗原特異性重組抗體的比例可低(dī)至10%。
在相關的文(wén)獻研究中，除了(le)Manz等人以及最近的Carroll和(hé)al - rubeai[20]和(hé)Taddeo等人的研究外(wài)，流式細胞術尚未常規應用(yòng)于抗原反應性IgG分泌細胞的鑒定。這(zhè)主要是由于缺乏表面免疫球蛋白(bái)，排除了(le)用(yòng)靶抗原染色特定細胞的選擇。然而，FACS已被成功用(yòng)于鑒定抗原特異性記憶B細胞，表達表面IgG作(zuò)爲B細胞受體的一部分。Weitkamp等(2003)利用(yòng)熒光病毒樣顆粒(VLPs)在96孔闆上(shàng)鑒定并将輪狀病毒特異性的人單B細胞分選到(dào)單孔中，然後進行培養，誘導抗體分泌。Amanna和(hé)Slifka設計(jì)了(le)一種FACS方法，用(yòng)于臨床樣本中破傷風(fēng)和(hé)白(bái)喉抗原特異性記憶B細胞的鑒定和(hé)定量。然而，他(tā)們沒有将其擴展到(dào)單細胞分選和(hé)進一步分析。di Niro等人描述了(le)輪狀病毒特異性B細胞分選後立即進行單細胞RT-PCR。
普健生物（我們）建立了(le)噬菌體展示抗體文(wén)庫技術平台以及新型的 Xten™ Mab Single B 兔單克隆抗體開(kāi)發技術平台。利用(yòng)B細胞分選富集策略，在流式分選設備的支持下(xià)，有效富集抗原特異性B細胞，提高(gāo)B細胞體外(wài)培養的成活率，保留B細胞的多樣性，可開(kāi)發出不同應用(yòng)需求的抗體。這(zhè)些(xiē)抗體具有多重優勢：
高(gāo)特異性：與小(xiǎo)鼠和(hé)其他(tā)齧齒動物相比，兔免疫系統更優秀，産生的抗體特異性更強，親和(hé)力更高(gāo)
高(gāo)穩定性：與常規小(xiǎo)鼠生産的單克隆抗體相比，兔IgG結構穩定性高(gāo)
高(gāo)親和(hé)力：兔的B細胞成熟過程産生的親和(hé)力是齧齒動物的10-100倍
高(gāo)多樣性：兔擁有豐富的B細胞反應庫，其産生的抗體在表位變異、突變、構象變化等方面優勢顯著，且多樣性高(gāo)
單B細胞篩選策略避免了(le)雜(zá)交瘤融合和(hé)組合展示，已成爲高(gāo)效采集免疫動物和(hé)人天然抗體庫的重要技術。使用(yòng)一系列方法檢測不同B細胞亞群是一種有吸引力的選擇，可确保産生大(dà)量和(hé)多樣化的高(gāo)質量抗體組合。多種抗體的産生以及發現(xiàn)罕見的具有獨特和(hé)理(lǐ)想特征的産生IgG的B細胞克隆的能(néng)力，有助于鑒定适合目的的分子，并可開(kāi)發成治療藥物或研究試劑。
