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兔單克隆抗體作(zuò)爲高(gāo)靈敏度檢測工(gōng)具在植物學中的應用(yòng)

發表時(shí)間:2023-10-08 訪問次數:230

薩摩矮病毒(Satsuma dwarf virus,SDV)自(zì)1952年被初次描繪爲植物移轉病症(Yamada & Sawamura,1952)後,其存在可回溯到(dào)二十世紀三十年代,在日本的靜岡縣,它一直被視(shì)爲一種神秘的疾病。直到(dào)1962年,人們才發現(xiàn)了(le)這(zhè)種病毒的實體——直徑在26-28nm之間的二十面體病毒顆粒(Saito & Hibino,1962)。更令人驚奇的是,在日本的一些(xiē)農(nóng)村地區(qū),還出現(xiàn)了(le)柑橘花(huā)葉病、臍橙感染斑駁病和(hé)旱台矮病,所有這(zhè)些(xiē)都被确認爲由類似病毒所引起的。

薩摩矮病毒(Satsuma dwarf virus, SDV)及其相關病毒在柑橘(Citrus unshiu Marc.)中引起嚴重的疾病,受影響的樹木(mù)表現(xiàn)爲矮化和(hé)生長不良,産量逐漸下(xià)降。柑橘花(huā)葉病導緻柑橘等柑桔品種果皮出現(xiàn)各種綠色花(huā)紋,商業價值下(xià)降。這(zhè)些(xiē)病毒被認爲通過嫁接和(hé)土壤傳播。目前,沒有有效的措施從(cóng)受感染的樹木(mù)上(shàng)清除這(zhè)些(xiē)病毒。因此,及早發現(xiàn)并消除受感染的樹木(mù)非常重要,特别是對(duì)于最大(dà)限度地減少與這(zhè)些(xiē)病毒感染相關的經濟負擔。

SDV和(hé)SDV相關病毒的二十面體病毒粒子含有二分正義單鏈RNA基因組(RNA1;7.0 kb,RNA2;5.4 kb)。所有病毒粒子均由RNA42編碼的兩種外(wài)殼蛋白(bái)(大(dà)成分22 kDa和(hé)小(xiǎo)成分2 kDa)組成。SDV和(hé)SDV相關病毒已通過PCR及酶聯免疫吸附試驗(ELISA)進行檢測。由于PCR和(hé)ELISA需要專門(mén)的技術和(hé)昂貴的設備和(hé)試劑,因此已經開(kāi)發出一種免疫層析測定(ICA)用(yòng)于在現(xiàn)場樣品中檢測這(zhè)些(xiē)病毒。特别是,Kusano等人開(kāi)發的ICA系統由于其更高(gāo)的靈敏度和(hé)可靠性,不僅可用(yòng)于診斷 SDV,還可用(yòng)于診斷 SDV 相關病毒,例如柑橘花(huā)葉病毒(CiMV)和(hé)臍橙傳染性斑駁病毒(NIMV),被廣泛應用(yòng)于種植領域。然而,最近報(bào)道(dào)了(le)一種新型CiMV分離株——在日本愛媛縣發現(xiàn)的其中一種分離株CiMV Az-1(B291)導緻廣泛感染,并對(duì)薩摩柑橘種植造成嚴重經濟損失。新型的CiMV分離株難以使用(yòng)ICA系統進行鑒定,因此迫切需要開(kāi)發一種新的診斷系統來(lái)檢測這(zhè)些(xiē)分離株。

 

爲了(le)開(kāi)發ICA試劑盒等診斷系統,開(kāi)發高(gāo)特異性和(hé)高(gāo)親和(hé)力的單克隆抗體(mAb)至關重要。研究人員爲了(le)獲得抗CiMV單克隆抗體(mAb),通過對(duì)應于CiMV外(wài)殼蛋白(bái)中11-475殘基(485 aa)的肽對(duì)家兔進行免疫,因爲兔抗體具有高(gāo)親和(hé)力,可以成爲診斷的有力工(gōng)具。

最終獲得的兔抗CiMV單克隆抗體使用(yòng)表面等離子體共振(SPR)進行動力學檢測,顯示出單克隆抗體(mAb)均對(duì)CiMV肽具有高(gāo)親和(hé)力。爲了(le)确認本研究獲得的單克隆抗體(mAb)是否檢測到(dào)葉片中的CiMV和(hé)SDV樣病毒,通過ELISA和(hé)斑點印迹分析對(duì)單克隆抗體(mAb)進行了(le)評估。結果表明(míng),研究獲得的單克隆抗體(mAb)可識别CiMV Az-1(B291)分離株。通過利用(yòng)這(zhè)些(xiē)mAb,研究人員期望可以開(kāi)發出一種針對(duì)CiMV Az-1(B291)分離株的靈敏且簡單的診斷試劑盒。

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