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在很(hěn)多實驗過程中我們都需要用(yòng)到(dào)穩定細胞系，隻是因爲其構建時(shí)間長、構建成功率低(dī)，使得大(dà)家放(fàng)棄這(zhè)個方法。構建穩定細胞株往往耗時(shí)半年以上(shàng)，别人的實驗都收尾了(le)，而這(zhè)邊卻一點動靜都沒有，可以說，其中耗費的精力足夠寫一篇血淚史了(le)。那麽，如何構建穩定細胞株呢(ne)?今天，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。
首先，我們需要知(zhī)道(dào)，在什(shén)麽情況下(xià)，需要構建穩定細胞株。
1、長期目的細胞研究時(shí)。一些(xiē)細胞需要長期研究，通過構建穩定細胞株可以降低(dī)細胞變異率，極大(dà)程度上(shàng)方便了(le)實驗研究;
2、蛋白(bái)半衰期時(shí)間長時(shí)。當蛋白(bái)半衰期長時(shí)，瞬時(shí)RNA就隻能(néng)通過幹擾表達，但(dàn)是卻無法去除已經表達的蛋白(bái)，通過穩定細胞株則可以更輕松實現(xiàn);
3、高(gāo)拷貝數表達需求時(shí)。這(zhè)個時(shí)候會(huì)因爲一些(xiē)人爲原因導緻結果不準确;
4、需要誘導表達時(shí)。主要是一些(xiē)緻死基因或者是需要空(kōng)表達的;
5、需要用(yòng)到(dào)細胞時(shí)。比如裸鼠成瘤時(shí);
那麽，如何構建穩定細胞株呢(ne)?其具體原理(lǐ)是怎樣的?
其實就是通過将外(wài)源DNA/RNA克隆到(dào)具有某種抗性基因的載體上(shàng)，重組載體被轉染之宿主細胞并整合到(dào)染色體中，能(néng)夠随着細胞分裂而穩定地傳代下(xià)去;
構建穩定細胞株有哪些(xiē)方面需要注意的?
穩定細胞株構建是一個長期過程，從(cóng)質粒包裝到(dào)慢病毒包裝，再到(dào)細胞感染以及篩選等等過程，每一步都至關重要。往往會(huì)因爲一些(xiē)小(xiǎo)的失誤，導緻半年時(shí)間浪費掉的現(xiàn)象也(yě)不少見，所以，細節方面一定要嚴格把控;
對(duì)于一些(xiē)小(xiǎo)公司來(lái)說，穩定細胞株的構建可謂得不償失，但(dàn)是對(duì)于長期發展來(lái)說，穩定細胞株可以說是一項必不可少的技術。相對(duì)于一般的蛋白(bái)制備手段來(lái)說，穩定細胞株構建不僅能(néng)有效減少批次之間的差異問題，更是能(néng)在極大(dà)程度上(shàng)保證蛋白(bái)抗體的活性一緻性。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供穩定細胞株構建服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
