在我們進行蛋白(bái)表達時(shí),常常會(huì)加入一些(xiē)肽類和(hé)蛋白(bái),使得其與目的蛋白(bái)融合表達,以便于我們進行進一步的檢測、跟蹤和(hé)純化。這(zhè)類肽類和(hé)蛋白(bái),我們稱之爲标簽蛋白(bái)(也(yě)叫蛋白(bái)标簽)。一般來(lái)說,蛋白(bái)标簽對(duì)蛋白(bái)本身并不會(huì)起到(dào)太大(dà)的作(zuò)用(yòng),但(dàn)是能(néng)夠爲我們蛋白(bái)表達的過程提供相關佐證。
蛋白(bái)标簽的具體作(zuò)用(yòng):
1、識别。通過給蛋白(bái)添加一些(xiē)易于識别的标簽,以達到(dào)快(kuài)速鑒定目的蛋白(bái)的目的;
2、跟蹤。通過定位标簽确定蛋白(bái)在細胞中的位置,進而了(le)解其生理(lǐ)功能(néng)和(hé)信号通路等;
3、定量。通過标簽來(lái)确定蛋白(bái)的量;
4、純化。通過識别标簽來(lái)對(duì)蛋白(bái)進行相關純化工(gōng)作(zuò);
常見的标簽蛋白(bái)及其特點:
1、his标簽。其特點是分子量小(xiǎo),不會(huì)影響到(dào)蛋白(bái)的理(lǐ)化性質,免疫原性低(dī),主要用(yòng)于蛋白(bái)純化;
2、FLAG标簽。其特點是分子量小(xiǎo),不會(huì)改變融合蛋白(bái)功能(néng),含有一個腸激酶切割位點,以便于标簽的去除。主要用(yòng)于免疫沉澱、免疫熒光以及ELISA制備;
3、GST标簽。特點是可用(yòng)于增加外(wài)源蛋白(bái)可溶性,在大(dà)腸杆菌中科實現(xiàn)大(dà)量表達,特異性高(gāo),純化方便;可用(yòng)于蛋白(bái)純化、酶學分析以及免疫分析;
4、c-Myc标簽。特點是以人Myc基因的一部分而盡量避免人源細胞的相關實驗。主要用(yòng)于WB、免疫沉澱、免疫熒光以及流式細胞術等;
5、HA标簽。特點是對(duì)外(wài)源蛋白(bái)空(kōng)間結構影響小(xiǎo),容易構成标簽蛋白(bái)。主要用(yòng)于蛋白(bái)純化、ELISA以及免疫沉澱等;
當然了(le),雖然說很(hěn)多标簽都适用(yòng)于蛋白(bái)純化等操作(zuò),但(dàn)是也(yě)要結合實際情況來(lái)進行選擇,這(zhè)樣不僅能(néng)提升蛋白(bái)制備的成功率,也(yě)能(néng)在更大(dà)程度上(shàng)滿足标簽蛋白(bái)的需求,當然了(le),制備成本也(yě)能(néng)得到(dào)很(hěn)好(hǎo)的控制。武漢蒲建設橫五專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供蛋白(bái)制備服務,如果您有香瓜需求,歡迎來(lái)電咨詢。