使用(yòng)單個B細胞技術制備兔單克隆抗體

單克隆抗體的制備是一項複雜(zá)而精細的工(gōng)作(zuò)，單B細胞抗體開(kāi)發技術是近年來(lái)新興的單克隆抗體制備技術。它是将單細胞分離鑒定技術結合多種PCR技術形成的一種單克隆抗體體外(wài)篩選及表達體系，以單個B細胞爲起始點，利用(yòng)每個B細胞隻産生一種特異性抗體的特性，直接從(cóng)單個B細胞中擴增出抗體基因，進而獲得抗原特異性抗體。

B細胞單克隆抗體制備技術具有高(gāo)通量、高(gāo)效率、低(dī)細胞數等優點，所制備的抗體保留了(le)豐富的基因多樣性及輕重鏈可變區(qū)天然配對(duì)，是最新、最高(gāo)效的抗體篩選方法之一。特别是在快(kuài)速應對(duì)病原微生物傳染病的抗體開(kāi)發上(shàng)有着巨大(dà)優勢。

使用(yòng)單個B細胞技術制備兔單克隆抗體其流程主要包括三個重要步驟：鑒定和(hé)分離單個B細胞、擴增和(hé)克隆抗體基因、重組抗體的表達與鑒定以及抗體的擴大(dà)培養和(hé)純化。普健生物Xten™Mab Single B 兔單克隆抗體制備無需兔骨髓瘤細胞商業化授權，采用(yòng)獨特的細胞分選和(hé)富集技術，實現(xiàn)了(le)單B細胞平台從(cóng)特異性到(dào)功能(néng)性的篩選、并保證Assay結果的準确度，提高(gāo)總體篩選的工(gōng)作(zuò)效率、減少下(xià)遊表達驗證的工(gōng)作(zuò)量、縮短抗體發現(xiàn)的周期，爲抗體藥開(kāi)發節省了(le)寶貴的時(shí)間。

鑒定和(hé)分離單個B細胞
單個B細胞的分離通常有随機分離和(hé)抗原特異性分離兩種。免疫兔子後獲得抗原特異性抗體濃度較高(gāo)的血樣，從(cóng)中分離B細胞，操作(zuò)簡單。方法主要有顯微操作(zuò)、激光捕獲顯微切、熒光激活細胞分選法。還有一種适合于抗腫瘤抗體、自(zì)身免疫抗體等特異性抗體含量較低(dī)的抗原特異性分離方法，該方法需分離抗原特異性B細胞，方法包括：熒光标記抗原多參數細胞分、抗原标記磁珠分選法、微雕法、以及細胞微陣列芯片等。

擴增和(hé)克隆抗體基因
細胞分選時(shí)，通常需将單個B細胞分至内含适量細胞裂解液、RNA 酶抑制劑和(hé)PCR反應試劑的适當容器中進行B細胞培養，然後對(duì)分泌抗體檢測陽性的孔進行進RNA提取逆轉錄。通常采用(yòng)合适的引物進行巢式或半巢式逆轉錄 PCR (Nested or semi-nested RT-PCR)擴增抗體可變序列。
表達、篩選和(hé)鑒定抗原特異性抗體
鑒定抗體的抗原特異性和(hé)生物活性前需将攜帶有抗體基因的表達載體在相應系統中表達，如原核表達系統、真核表達系統。通過親和(hé)層析和(hé)離子交換層析純化到(dào)的抗體，也(yě)可通過免疫沉澱、控斑法、空(kōng)斑減少中和(hé)測定法流式分析法、活細胞成像測定法、體内藥物活性測定法等方法進一步測定抗體與抗原的特異性、親和(hé)力以及中和(hé)活性保護活性等生物學特性。

單個B細胞技術由于可以直接獲得重輕鏈正确配對(duì)的抗體序列，變得越來(lái)越有吸引力，某些(xiē)方面具有不可替代的優勢。但(dàn)是由于該技術對(duì)設備的高(gāo)度依賴性，并且對(duì)抗原标記、引物設計(jì)的高(gāo)效性和(hé)準确性方面有較高(gāo)要求，對(duì)實驗人員技術要求較高(gāo)。普健生物新型的Xten™ Mab Single B 兔單克隆抗體開(kāi)發技術平台利用(yòng)B細胞分選富集策略，在流式分選設備的支持下(xià)，有效富集抗原特異性B細胞，提高(gāo)B細胞體外(wài)培養的成活率，保留B細胞的多樣性，可開(kāi)發出不同應用(yòng)需求的抗體。
服務優勢
1.高(gāo)特異性：與小(xiǎo)鼠和(hé)其他(tā)齧齒動物相比，兔免疫系統更優秀，産生的抗體特異性更強，親和(hé)力更高(gāo)
2.高(gāo)穩定性：與常規小(xiǎo)鼠生産的單克隆抗體相比，兔IgG結構穩定性高(gāo)
3.高(gāo)親和(hé)力：兔的B細胞成熟過程産生的親和(hé)力是齧齒動物的10-100倍
4.高(gāo)多樣性：兔擁有豐富的B細胞反應庫，其産生的抗體在表位變異、突變、構象變化等方面優勢顯著，且多樣性高(gāo)


案例展示

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