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人類巨細胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV）是最常見的先天性感染病原體之一，屬于疱疹病毒科中結構最複雜(zá)的一種病毒，在大(dà)部分人群中存在隐性感染，當機體免疫力下(xià)降時(shí)将出現(xiàn)活動性HCMV感染，甚至危及患者生命。
HCMV(人類巨細胞病毒)屬于疹病毒科乙組疤疹病毒亞科，是最大(dà)的動物病毒之一，其感染非常普遍。HCMV感染可以導緻間質性肺炎、免疫力受抑及器官植入失敗，其感染形式多呈隐性感染或潛伏感染。對(duì)于大(dà)多數人來(lái)說，HCMV感染不是一個大(dà)問題，但(dàn)對(duì)于高(gāo)危患者則是危及生命的。當機體免疫力降低(dī)時(shí)，潛伏狀态HCMV再活化而引起發病，如器官移植後接受免疫抑制劑治療、惡性腫瘤化療、HIV感染導緻免疫缺陷或免疫抑制狀态。
HCMV結構蛋白(bái)包括衣殼蛋白(bái)被膜蛋白(bái)以及包膜蛋白(bái)，研究最廣泛的是後兩者，其中被膜磷蛋白(bái)和(hé)包膜糖蛋白(bái)抗原性強，具有廣泛的臨床應用(yòng)前景。
有5種被膜磷蛋白(bái)研究比較清楚PP150、PP65、PP71、PP28和(hé)PP67。PP150的DNA序列和(hé)氨基酸序列與其他(tā)疹病毒無同源性，其抗原性在HCMV結構蛋白(bái)中最強，由于HCMV中還存在150kDa的衣殼蛋白(bái)，二者需雙向SDS-PAGE才易分開(kāi)并且需要免疫學鑒定因而限制了(le)PP150的應用(yòng)；PP65是被膜蛋白(bái)中最主要的一種，分子量爲65kDa，它占被膜蛋白(bái)緻密顆粒的95%，占整個病毒蛋白(bái)的15%在不同的HCMV毒株中，PP65具有高(gāo)度保守性，整個感染周期中，PP65在感染細胞中持續表達，它在病毒感染及誘導機體免疫反應中起重要作(zuò)用(yòng)，它不僅可誘導高(gāo)水(shuǐ)平的特異性循環抗體，而且能(néng)誘導特異性的細胞免疫反應，目前其單克隆抗體在臨床上(shàng)用(yòng)于PP65血症的診斷；PP28與其他(tā)疹病毒具有部分同源性，已有PP28DNA在大(dà)腸杆菌中表達獲得融合蛋白(bái)的報(bào)道(dào)，該融合蛋白(bái)可作(zuò)爲抗原檢測患者血清中相應的抗體；PP67的單克隆抗體無中和(hé)活性。
包膜糖蛋白(bái)是病毒毒粒表面的抗原決定簇，是有包膜病毒表面脂質雙層膜的重要成分，它們與病毒識别宿主細胞膜受體、吸附和(hé)穿入細胞病毒的緻病作(zuò)用(yòng)以及誘導宿主的免疫反應密切相關。HCMV包膜上(shàng)至少有8種以上(shàng)可以用(yòng)電泳技術區(qū)分的糖蛋白(bái)複合物，其中研究最廣泛的是gB。gB是誘導産生抗HCMV中和(hé)抗體的主要抗原，目前最受關注的是其中AD-1和(hé)AD-2兩個抗原決定簇。gB上(shàng)的第552~635個氨基酸之間的區(qū)域即AD-1，被證實是HCMV感染後引發體液免疫的主要抗原決定簇。AD-1是一個複雜(zá)的結構域，它包含一系列連續的長度大(dà)于70bp的抗體結合位點。中和(hé)抗體與非中和(hé)抗體可以競争性地與AD-1結合，有學者用(yòng)含AD-1所有結構域的蛋白(bái)重組體來(lái)檢測與AD-1相結合的單克隆抗體的特異性及純化多克隆抗體的親和(hé)力，結果顯示所有單克隆抗體都擁有結合到(dào)重組蛋白(bái)的特有模式，說明(míng)在AD-1含有與抗體結合的獨特位點，單克隆抗體與AD1的結合模式并不能(néng)預測單克隆抗體的中和(hé)活性。
抗AD-1的單克隆抗體阻止細胞與病毒融合的能(néng)力可達到(dào)20%~60%；AD-2的免疫原性很(hěn)弱但(dàn)被免疫系統識别後可以加強免疫保護作(zuò)用(yòng)。AD-2的單克隆抗體能(néng)有效阻止細胞與病毒的融合遠遠強于抗AD-1的單克隆抗體，但(dàn)兩種單克隆抗體對(duì)于硫酸乙酷肝素介導的病毒吸附都沒有阻止作(zuò)用(yòng)。抗AD-2的單克隆抗體發揮中和(hé)病毒感染作(zuò)用(yòng)的機制可能(néng)是阻止了(le)在病毒與細胞接觸初期受體與配體的結合過程，還有研究将抗AD-2的單克隆抗體的單鏈可變區(qū)制備成單體形式和(hé)二聚體形式，研究它們的中和(hé)作(zuò)用(yòng)及與AD-2作(zuò)用(yòng)的動力學發現(xiàn)單體形式無中和(hé)作(zuò)用(yòng)，而二聚體形式盡管會(huì)與相結合的gB發生緩慢的解離，但(dàn)卻有中和(hé)活性。
鼠源性抗體在臨床應用(yòng)中可能(néng)會(huì)出現(xiàn)免疫原性，導緻患者體内出現(xiàn)抗抗體，還有可能(néng)出現(xiàn)過敏反應，因此限制了(le)其應用(yòng)。有研究人員用(yòng)感染過HCMV的健康人體的淋巴細胞與小(xiǎo)鼠骨髓瘤細胞融合，融合細胞産生人源性抗體。普健生物作(zuò)爲一站(zhàn)式蛋白(bái)抗體開(kāi)發專家，在蛋白(bái)抗體領域擁有超過15年的技術經驗積累，基于普健專業的技術團隊、五大(dà)蛋白(bái)表達系統和(hé)三大(dà)核心技術路線，不僅可實現(xiàn)從(cóng)抗原制備，到(dào)抗體生産，标記，檢測，測序一站(zhàn)式服務，還能(néng)幫助客戶輕松實現(xiàn)抗體人源化。
抗體人源化是指通過DNA重組技術和(hé)蛋白(bái)質工(gōng)程技術，将鼠源單克隆抗體的大(dà)部分氨基酸人源化，以降低(dī)其異源性，保留親本鼠單克隆抗體的親和(hé)力和(hé)特異性，這(zhè)種通過基因重組所表達的抗體既有鼠源成分，又有人源成分，所以稱爲人源化抗體。
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案例展示
國内許多學者也(yě)進行了(le)HCMV單克隆抗體的篩選，但(dàn)大(dà)多數目的是用(yòng)于抗原血症的早期準确檢測。兩個或多個特異性強的重組抗原聯合使用(yòng)制備特異性診斷性抗體，将是進一步的研究方向。理(lǐ)論上(shàng)講在感染初期使用(yòng)McAbs可中和(hé)病毒顆粒活化能(néng)使病毒感染細胞溶解的補體，從(cóng)而防治HCMV感染但(dàn)随着感染的發展，HCMV已整合到(dào)宿主細胞的細胞核中，并大(dà)量複制而誘發各種臨床綜合征，因此早期診斷、早期用(yòng)藥就至關重要。
參考文(wén)獻
Han Dong-mei, Yin Wen, Chen Xie-qun. The evolution about the treatment of HCMV-infection by McAb [J]. Foreign Med Sci: Epidemiol Loimol,2004,31(03): 158-160.
