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在我們進行真核細胞蛋白(bái)表達時(shí)，真核細胞培養是一個必不可少的過程，就和(hé)雜(zá)交瘤細胞蛋白(bái)表達中的雜(zá)交瘤細胞融合一樣，它從(cóng)根本上(shàng)制約着真核蛋白(bái)表達的成功與否。然而，和(hé)蛋白(bái)表達一樣，我們在進行真核細胞培養的過程中，也(yě)常常會(huì)遇到(dào)各種各樣的問題。有鑒于此，普健生物在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家聊聊有關真核細胞培養中的幾個常見問題，以及遇到(dào)這(zhè)些(xiē)問題時(shí)的解決方案。
1、細胞不貼壁
在培養過程中，如果細胞不貼壁，一般來(lái)說造成這(zhè)個現(xiàn)象的原因主要有三種：胰蛋白(bái)酶消化過度、支原體污染以及培養液中缺乏貼壁因子。這(zhè)個時(shí)候，我們可以考慮通過降低(dī)胰蛋白(bái)酶濃度、分離培養物以及清潔支架的方式來(lái)解決問題。當然了(le)，如果通過如上(shàng)幾個方式依然沒有解決，那麽，我們需要結合培養過程進行分析對(duì)比，找出其問題所在;
2、PH值變化快(kuài)
培養液中PH值變化過快(kuài)的原因相對(duì)較多，比如緩沖系統緩沖力不夠、培養液鹽濃度不正确、培養液污染、二氧化碳張力不夠等等，當出現(xiàn)這(zhè)個問題時(shí)，我們可以适當減少培養液中二氧化碳的含量，或者改用(yòng)不依賴二氧化碳的培養液，并保證培養液的純度，減少其污染來(lái)解決;
3、細胞生長緩慢
在預定時(shí)間内細胞培養量不足，細胞存在生長緩慢的情況。其原因主要是培養液選擇不對(duì)、相關試劑保存不當以及培養液被污染(少量細菌或真菌感染)。當細胞培養緩慢時(shí)，我們可以考慮更換培養液成分、增加原始細胞濃度、補加谷氨酰胺或生長因子以及加入抗生素等方式來(lái)進行解決;
4、細胞死亡
培養一段時(shí)間後發現(xiàn)細胞直接死亡，這(zhè)個現(xiàn)象發生的主要原因是培養箱内缺二氧化碳、箱内溫度變化大(dà)、細胞損傷或死亡、培養過程中代謝(xiè)物堆積等，這(zhè)個時(shí)候，我們需要定時(shí)檢測箱内二氧化碳含量、控制好(hǎo)箱内溫度、實驗前檢測好(hǎo)細胞活性，并檢測培養液的滲透壓，這(zhè)樣才能(néng)在更大(dà)程度上(shàng)避免細胞的死亡;
當然了(le)，細胞培養過程中需要面臨的問題還有很(hěn)多，隻有将這(zhè)些(xiē)方面都好(hǎo)了(le)後，才能(néng)在更大(dà)程度上(shàng)保證細胞的培養。對(duì)于真核細胞表達來(lái)說，隻有活性好(hǎo)、質量高(gāo)的細胞才能(néng)在更大(dà)程度上(shàng)滿足我們後期有關蛋白(bái)制備的需求。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供真核蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
