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一、實驗目的
本案例基于普健自(zì)有哺乳表達系統—高(gāo)産量pATX系列載體及馴化CHO系列細胞，通過密碼子優化，基因合成方法，合成重鏈和(hé)輕鏈的可變區(qū)，再分别通過亞克隆的方式将可變區(qū)構建至PATX系列表達載體，雙質粒瞬時(shí)轉染XtenCHO細胞，通過SDS-PAGE驗證重組抗體表達情況，經表達驗證後，擴大(dà)培養收集細胞上(shàng)清并通過proteinA親和(hé)柱純化獲得重組抗體。
二、實驗方案
(1)以客戶提供的重鏈輕鏈序列爲模闆，通過密碼子優化，選擇更适宜XtenCHO細胞系的基因序列，進而确 定表達質粒的構建方案。
(2)采用(yòng)普健生物自(zì)主載體PATX進行構建，經測序驗證無誤後，提取無内毒素質粒。
(3)轉染前，确定XtenCHO細胞狀态，待轉染完成，培養數天後收取上(shàng)清，通過SDS-PAGE驗證重組抗體表 達情況，最後通過Protein A純化法獲得重組抗體。
三、實驗結果
(1)抗體純度鑒定
圖 1. 抗體質檢圖. 考馬斯亮(liàng)藍染色.
A. 還原PAGE. B. 非還原 PAGE.
(2)通過SEC-HPLC進一步純化，獲得單一峰的重組抗體，HPLC檢測純度在98%。
(3)抗體交付
純化抗體産量：5L表達體系
| 抗體 | 濃度及分裝 | 數量 | 質量 |
| 抗體 A | 25 mg/ml；1ml/管。 | 20管 | 500 mg |
注：内毒素水(shuǐ)平：0.45 EU/ml
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