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一、概述
兔單抗與傳統的雜(zá)交瘤鼠單抗相比具有更好(hǎo)的抗原識别功能(néng)。由于兔骨髓瘤細胞株受專利保護，無法利用(yòng)雜(zá)交瘤技術開(kāi)發兔單抗，普健生物建立了(le)噬菌體展示抗體文(wén)庫技術平台以及新型的Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發技術平台。
單個B細胞抗體制備技術是近年來(lái)新發展的一類快(kuài)速制備單克隆抗體的技術，是根據每一個B細胞隻含有一個功能(néng)性重鏈可變區(qū)DNA序列和(hé)一個輕鏈可變區(qū)DNA序列，以及每一個B細胞隻産生一種特異性抗體的特性，從(cóng)免疫動物脾組織或外(wài)周血中分離抗原特異性B細胞，通過單細胞PCR技術從(cóng)分泌抗體的單個B細胞中擴增IgG重鏈和(hé)輕鏈可變區(qū)基因，然後在哺乳動物細胞内表達并獲得具有生物活性的單克隆抗體。
圖1. XtenTM Mab 兔單克隆抗體開(kāi)發流程
二、服務内容
| 服務項目 | 客戶提供 | 服務内容 | 服務周期 | 交付内容 |
| XtenTM Mab 兔單克隆抗體開(kāi)發 | 抗原序列 |
抗原制備 動物免疫 脾細胞分離及陽性B細胞篩選 陽性克隆抗體可變區(qū)擴增及測序分析 重組抗體表達及純化 |
12周 |
100µg/株單抗 pUC質粒 3株最優的抗體序列 技術服務報(bào)告 |
案例展示：
利用(yòng)兔單B 抗體技術開(kāi)發Anti-human CD86 兔單抗。選取血清效價大(dà)于128K 的兔子，分離PBMC細胞進行流式分選， 獲得human CD86抗原特異性B細胞鋪闆。
圖1 兔單B 細胞流式分選結果
使用(yòng)普健生物XtenCHO高(gāo)密度瞬轉表達系統，體外(wài)重組表達部分陽性克隆抗體，純化後進行功能(néng)驗證。
圖2 兔單抗重組表達分析
純化後的抗體進行IF及内源WB 驗證。IF結果顯示抗體靈敏度高(gāo)，抗原定位正确;内源WB 結果顯示，主帶明(míng)顯，無非特異性結合條帶。
圖3 Anti-human CD86 兔單抗IF 檢測結果
RAJI細胞，一抗1:50，二抗1:50， 曝光時(shí)間30ms
圖4 Anti-human CD86 兔單抗内源WB分析
Lane 1: Daudi cell lysate ;Lane2: Raji cell lysate.
