經典案例|普健大(dà)腸杆菌表達系統

發表時(shí)間：2022-11-24 訪問次數：331

重組蛋白(bái)表達系列二

大(dà)腸杆菌表達系統

展示案例：E.coli Expression System

在普健生物所擁有的五大(dà)蛋白(bái)表達系統中，衆所周知(zhī)的基礎又經濟的系統當屬原核的大(dà)腸杆菌表達系統了(le)。

大(dà)腸杆菌表達系統因其代謝(xiè)途徑和(hé)基因表達調控機制研究透徹、培養周期短、目标基因表達水(shuǐ)平高(gāo)且遺傳背景清楚，是目前市面上(shàng)應用(yòng)最廣泛的表達系統。

當然大(dà)腸杆菌君，優點多多，缺點也(yě)明(míng)顯--就是讓廣大(dà)原核科研汪談之色變的包涵體。

而普健生物作(zuò)爲一家專注于蛋白(bái)表達技術的研究型高(gāo)新技術企業，通過對(duì)E.coli表達系統的豐富經驗以及熟練掌握，在E.coli系統上(shàng)的蛋白(bái)可溶性表達成功率達到(dào)90%以上(shàng)。

空(kōng)口無憑，下(xià)面小(xiǎo)編就給大(dà)家分享兩個案例：

CASE 1——PNGase F

PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一種酰氨酶，可在 N-連糖蛋白(bái)的高(gāo)甘露糖、雜(zá)合和(hé)複合寡糖部分最内側的 N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和(hé)天冬酰氨殘基之間進行切割。PNGase F幾乎可以水(shuǐ)解糖肽/糖蛋白(bái)中所有的 N-連接糖（X=H 或寡糖），不會(huì)去除常見植物糖蛋白(bái)上(shàng)含有核心α-(1,3)- 岩藻糖連接的寡糖。

PNGase F采用(yòng)普健大(dà)腸杆菌表達系統成功可溶表達，産量高(gāo)達107.1mg/L，純度>95%，經檢驗活性較高(gāo)。

P.S PNGase F酶有現(xiàn)貨哦，歡迎至普健生物官網留言訂購。

以圖爲鑒

Test Report

Expression test

PNGase F protein have expressed in strain No.1 and strain No.2 , the most optimal expression yield for PNGase F in native is strain No.1 , 16℃.

Fermentation and Purification

1L scale up purification test

Target protein purification profile

SEC AKTA purification

SEC AKTA purification result part A

Final QC

SDS-PAGE of fragment of SEC AKTA purification

CASE 2——Co-expression CKM/CKB

肌酸激酶（CK）是一個重要的能(néng)量調節酶，可逆催化肌酸與ATP之間的轉磷酰基反應，CK廣泛分布于心髒肌肉的包漿内。CK有M和(hé)B兩個亞基組成，以此分爲三個最基本的同工(gōng)酶：CKMM、CKMB、CKBB。目前在臨床上(shàng)應用(yòng)最多的是将CK與CKMB結合，用(yòng)于急性心肌梗塞的早期診斷；此外(wài)，CKBB蛋白(bái)也(yě)被應用(yòng)在急性呼吸道(dào)感染、病毒性腹瀉等疾病的基礎研究中。

CKM/CKB采用(yòng)普健大(dà)腸杆菌共表達系統實現(xiàn)可溶表達，并分别純化出有活性的CKMB和(hé)CKBB兩種酶，純度>95%。

P.S 該蛋白(bái)普健也(yě)有現(xiàn)貨哦，歡迎至普健生物官網留言訂購。

Purification Test(Mixture of CKBB and CKMB)