慢病毒安全穩定的基因操作(zuò)工(gōng)具

發表時(shí)間：2022-11-29 訪問次數：339

RNAi 是由雙鏈RNA分子介導，特異性降解同源性mRNA使其表達沉默的過程，是一種序列特異性的轉錄後基因沉默。RNAi技術日趨完善和(hé)成熟，目前已成爲基因研究不可缺少的工(gōng)具，并在功能(néng)基因組學、基因治療學等多領域發揮強大(dà)作(zuò)用(yòng)。

RNAi的實現(xiàn)首先需要制備性質穩定、作(zuò)用(yòng)持久的小(xiǎo)分子RNA，siRNA和(hé)shRNA都是RNAi技術中常用(yòng)的小(xiǎo)分子RNA。

實現(xiàn)RNAi效應，載體系統的選擇同樣重要。

目前載體系統主要分爲非病毒載體和(hé)病毒載體系統兩大(dà)類：非病毒載體具有低(dī)免疫原性、安全性較高(gāo)的優點，但(dàn)其轉染效率往往較低(dī)；病毒載體因具有較高(gāo)的轉染效率而更多地被用(yòng)于基因功能(néng)研究。常用(yòng)的病毒載體主要包括逆轉錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體等。

不同病毒載體對(duì)比：

載體種類	優勢	不足
逆轉錄病毒	易包裝獲得，免疫原性低(dī)，高(gāo)效感染，目的基因穩定地整合到(dào)靶細胞基因組而長期表達，且不産生輔助病毒。	滴度低(dī)，隻能(néng)感染分裂期細胞。
腺病毒	轉基因效率高(gāo)，宿主範圍較廣，能(néng)感染幾乎所有的細胞類型，能(néng)有效增殖，滴度高(gāo)，遺傳毒性較低(dī)，安全性高(gāo)。	目的基因不能(néng)整合進宿主細胞基因組。
腺相關病毒	既可以感染分裂細胞，也(yě)可以感染靜止細胞，免疫反應輕微。	攜帶外(wài)源基因的能(néng)力有限，整合時(shí)需要輔助病毒感染才能(néng)複制，滴度較低(dī)。

慢病毒載體

慢病毒載體是一種新型的基因轉移載體，屬于逆轉錄病毒科，爲二倍體RNA病毒，幾乎能(néng)夠感染所有組織來(lái)源的細胞，可通過逆轉錄酶将病毒RNA逆轉爲DNA，通過病毒整合酶整合入宿主細胞基因組，使被感染的細胞及其子代細胞長期穩定表達病毒基因。常見的慢病毒有：HIV（人類免疫缺陷病毒）、FIV（貓免疫缺陷病毒）以及EIAV（馬傳染性貧血病毒）等。

慢病毒載體系統 是目前廣泛使用(yòng)的基因操作(zuò)工(gōng)具，已從(cóng)第一代發展到(dào)至今的第三代，其穩定性及生物安全性不斷改進和(hé)提高(gāo)。

慢病毒載體系統由pGCSIL-GFP載體、pHelperl.0(gag/pol元件)載體、pHelper2.0(VSVG元件)載體三質粒組成，其中pGCSIL-GFP載體含有能(néng)持續表達小(xiǎo)RNA的元件，同時(shí)能(néng)表達熒光蛋白(bái)GFP，pHelperl.0和(hé)pHelper2.0含有病毒包裝所必需的元件。