細胞轉染之穩定細胞株的構建_亞聯美華（武漢）生物科技有限責任公司

細胞轉染,簡而言之，就是将外(wài)源分子（如DNA,RNA等）導入真核細胞中的一種技術。

分類：

瞬時(shí)轉染（transient gene expression, TGE）和(hé)穩定轉染(stable gene expression，SGE)兩種。

瞬時(shí)轉染

指外(wài)源 DNA或RNA 轉入宿主細胞後不整合到(dào)宿主染色體中進行外(wài)源目的基因的表達。

特點：

1.目的基因未整合到(dào)染色體上(shàng)，超螺旋質粒DNA有較高(gāo)的轉染效率；

2.轉染24h-72h後常需要用(yòng)到(dào)一些(xiē)報(bào)告系統如熒光蛋白(bái)、β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測；

3.表達持續時(shí)間48-72h,随細胞分裂而稀釋直至丢失；

4.用(yòng)于快(kuài)速分析:如基因産物短期表達、蛋白(bái)質小(xiǎo)規模表達純化。

穩定轉染

指外(wài)源DNA轉入宿主細胞後将外(wài)源目的基因整合到(dào)宿主染色體中進行表達。

特點：

1.目的基因整合到(dào)染色體上(shàng)，需要使用(yòng)線性DNA（線性DNA雖然比超螺旋狀的DNA轉入量低(dī)，但(dàn)整合率高(gāo)）；

2.外(wài)源DNA整合到(dào)宿主細胞染色體中大(dà)約爲1%，通常需要通過一些(xiē)選擇性标記反複篩選，才能(néng)得到(dào)穩定轉染的同源細胞系。

3.随宿主細胞基因組複制、轉錄、翻譯，并被穩定遺傳；

4.用(yòng)于獲得穩定表達的外(wài)源基因的單細胞克隆：如大(dà)規模蛋白(bái)質的合成，長期的藥理(lǐ)學研究遺傳機制的研究等。

圖1 細胞轉染流程圖

細胞轉染的方法

物理(lǐ)法：電穿孔法、顯微注射法和(hé)基因槍法；

化學法：磷酸鈣共沉澱法、脂質體轉染方法、多種陽離子物質介導；

生物法：病毒介導轉染、逆轉錄病毒、腺病毒。

一些(xiē)轉染方法方法的比較

轉染方法	原理(lǐ)	應用(yòng)	特點
電穿孔法	高(gāo)脈沖電壓破壞細胞膜點位，DNA通過膜上(shàng)形成的小(xiǎo)孔導入	瞬時(shí)轉染所有細胞	胞用(yòng)量大(dà)，需要根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件
顯微注射法	用(yòng)顯微操作(zuò)将DNA直接注入靶細胞核	穩定轉染瞬時(shí)轉染	轉染細胞數有限，多用(yòng)于工(gōng)程改造或轉基因動物的胚胎細胞
基因槍法	将DNA用(yòng)顯微重金(jīn)屬顆粒沉澱，再将包被好(hǎo)的顆粒用(yòng)彈道(dào)裝置射入細胞，DNA在胞内逐步釋放(fàng)表達	瞬時(shí)轉染穩定轉染	用(yòng)于人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞及原代細胞
磷酸鈣法	磷酸鈣DNA複合物吸附細胞膜被細胞内吞	穩定轉染瞬時(shí)轉染	不适用(yòng)于原代細胞，操作(zuò)簡便但(dàn)重複性差，有些(xiē)細胞不适用(yòng)
陽離子脂質體法	帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成複合物被細胞内吞	穩定轉染瞬時(shí)轉染所有細胞	實用(yòng)性廣，轉染效率高(gāo)，重複性好(hǎo)，但(dàn)轉染時(shí)需要除血清。轉染效果随細胞類型變化大(dà)
病毒介導法	通過侵染宿主細胞将外(wài)源基因整合到(dào)染色體中	穩定轉染	可用(yòng)于難轉染的細胞、原代細胞，體内細胞等
逆轉錄病毒	通過病毒中膜糖蛋白(bái)和(hé)宿主細胞表面的受體相互作(zuò)用(yòng)而進入宿主細胞，之後反轉入酶啓動合成DNA并随機整合到(dào)宿主基因組中。	特定宿細胞	攜帶基因不能(néng)太大(dà)，細胞需要處于分裂期，需考慮安全因素
腺病毒	通過侵染宿主細胞将外(wài)源基因整合到(dào)染色體中	瞬時(shí)轉染特定宿主細胞	可用(yòng)于難轉染的細胞，需要考慮安全因素