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納米抗體作(zuò)爲一種用(yòng)途廣泛的小(xiǎo)分子抗體，因其體積小(xiǎo)、親水(shuǐ)性強、穩定性好(hǎo)、易于生産等優勢越來(lái)越受歡迎，尤其在疾病診斷與治療、病原檢測、藥物殘留分析、環境監測等領域都展現(xiàn)出了(le)良好(hǎo)的應用(yòng)前景。
納米抗體(Nanobody，Nb)指重鏈單域抗體VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody) ，該類抗體隻包含一個重鏈可變區(qū)（VHH）和(hé)CH2，CH3區(qū)，相比于其他(tā)抗體，輕鏈天然缺失。納米抗體晶體直徑2.5nm，長4nm，分子量一般在12-15KD，是自(zì)然存在的可以和(hé)抗原結合的最小(xiǎo)片段。
納米抗體VHH的表面大(dà)概隻有10個氨基酸與人VH的不同，在FR2中存在有四個特異的氨基酸：普通抗體FR2中V37、G44、L45和(hé)W47這(zhè)4個氨基酸殘基是在進化中相當保守的疏水(shuǐ)性殘基，而VHH中，這(zhè)四個突變爲親水(shuǐ)性的氨基酸殘基F37、E44、 R45、G47，增加了(le)VHH的水(shuǐ)溶性。利用(yòng)這(zhè)一特性，可将人源抗體VH的序列進行優化，對(duì)FR2中的一些(xiē)氨基酸進行VHH特征性改造，從(cóng)而使VH抗體的穩定性和(hé)溶解性更好(hǎo)，并且保持原有的特異性和(hé)親和(hé)力。
納米抗體和(hé)傳統抗體的優劣對(duì)比
| 性能(néng) | 傳統抗體 | 納米抗體 |
| 抗體表達 | 在哺乳表達系統中表達，周期長、成本高(gāo) | 既可在哺乳系統中表達，又可在大(dà)腸杆菌表達系統中表達，表達的抗體具有高(gāo)水(shuǐ)溶性、易複性 |
| 抗體穩定性 | 易失活，高(gāo)溫或極度PH下(xià)失效或分解 | 高(gāo)穩定性，高(gāo)耐性，90℃處理(lǐ)後依然保持較高(gāo)的活性 |
| 免疫原性 | 較高(gāo) | 較低(dī) |
| 組織穿透力 | 較低(dī) | 較高(gāo)，可穿透血腦(nǎo)屏障 |
| 半衰期 | 較長 | 較短，血清清除速度快(kuài) |
納米抗體的制備
目前，制備納米抗體主要途徑使用(yòng)免疫庫和(hé)天然庫進行制備。普健生物通過十餘年的抗體發現(xiàn)技術的積累和(hé)叠代，具備完善的納米抗體天然庫和(hé)免疫庫制備平台，提供羊駝免疫，納米抗體VHH噬菌體建庫及淘選技術服務，更有千億級VHH納米抗體天然噬菌體文(wén)庫可淘選各類靶點抗原，大(dà)大(dà)縮短藥物開(kāi)發周期。
| 服務項目 | 服務内容 | 服務周期 | 交付内容 |
| 天然庫淘選 | 3-4輪淘選 多克隆ELISA驗證 單克隆ELISA驗證 陽性克隆ELISA驗證 測序 實驗報(bào)告 |
4周 | 陽性菌株1-3株 VHH序列1-3條 技術服務報(bào)告 |
| 免疫庫建庫及淘選 | 抗原質檢 羊駝免疫 噬菌體文(wén)庫構建 噬菌體文(wén)庫淘選 |
10周 | 噬菌體免疫文(wén)庫(大(dà)于5*108 pfu的phage) 陽性菌株5-10株 VHH序列5-10條 技術服務報(bào)告 |
針對(duì)靶點B的特異性納米抗體制備過程
普健生物可以提供針對(duì)特定靶點的特異性納米抗體定制服務，包括抗原檢測，羊駝免疫，采血，效價檢測，納米抗體噬菌體庫構建及淘選，特異性高(gāo)親和(hé)力納米抗體篩選，表達，檢測一條龍服務。親和(hé)力可以達到(dào)108~1010M級别。
1. 靶點B免疫羊駝，進行四輪免疫後采血提取PBMC，經RNA提取，反轉錄獲得cDNA後擴增獲取VHH可變區(qū)片段；
2. 免疫羊駝納米抗體庫的構建：
将獲得的VHH可變區(qū)片段連入噬菌體展示載體，電轉宿主菌，最終獲得庫容爲8.76x10^9納米抗體庫，插入正确率爲100%
3. 免疫羊駝納米抗體庫的淘選及篩選：
利用(yòng)構建的免疫羊駝納米抗體庫，針對(duì)靶點B蛋白(bái)，完成三輪淘選，其淘選富集度如下(xià)：
篩選96個克隆，其中陽性克隆共94個，陽性率爲97.9%。
排除重複序列，最終獲得了(le)7條不同的抗體序列。将這(zhè)些(xiē)抗體序列表達成可溶性的VHH抗體蛋白(bái)，進行再次驗證，結果如下(xià)：
随機挑選兩條抗體蛋白(bái)進行親和(hé)力測定，結果如下(xià)：
R1P1-A10：KD：6.49E-09M
R1P1-H12：KD：1.52E-07M
