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曆經40餘年的發展，噬菌體展示技術日趨成熟，已然成爲抗體發現(xiàn)技術的主流平台之一。随着抗體工(gōng)程的高(gāo)速發展，抗體藥從(cóng)鼠源到(dào)全人源的産業已成趨勢，科研人員對(duì)于抗體功能(néng)的改造、雙/多特異性抗體的研發需求更甚，對(duì)抗體篩選和(hé)優化的技術要求也(yě)進一步提高(gāo)，噬菌體展示技術也(yě)在這(zhè)個過程中也(yě)發揮越來(lái)越重要作(zuò)用(yòng)。
噬菌體展示抗體庫是目前發展最成熟、應用(yòng)最爲廣泛的基因工(gōng)程抗體篩選技術，通過噬菌體展示技術使基因工(gōng)程抗體以融合蛋白(bái)的形式展示在噬菌體外(wài)殼蛋白(bái) gpⅢ或 gpⅧ的 N 端，從(cóng)而将抗體的基因型和(hé)表型連接起來(lái)，用(yòng)固相或液相化抗原與抗體庫孵育，經「吸附—洗脫—擴增」數個循環使特異性克隆得以富集，因而具有簡便、快(kuài)速和(hé)高(gāo)效的優點。
噬菌體展示技術的優勢
1. 方法簡便快(kuài)速、耗時(shí)少。從(cóng) mRNA 提取到(dào)抗體庫構建，繼而篩選出特異性抗體的陽性克隆僅需幾周的時(shí)間。
2. 篩選容量大(dà)、效率高(gāo)。噬菌體抗體庫中通常含有 106-109 個不同抗原結合特異性的抗體分子克隆，可以對(duì)百萬乃至億萬個分子進行選擇，且每一輪「吸附-洗脫-擴增」可以使抗原特異性較強的克隆得到(dào)富集，非常容易從(cóng)抗體庫中篩選到(dào)特異性抗體。
3. 易于在基因水(shuǐ)平操作(zuò)，蛋白(bái)質表型與基因型統一。可以根據不同目的「随心所欲」地改造抗體結構、進行基因突變，制備各種新型抗體；另外(wài)，還可以将噬菌體抗體與一些(xiē)功能(néng)性分子偶聯形成免疫毒素、酶标抗體等，進一步拓寬了(le)抗體的應用(yòng)範圍。
4. 易于規模化生産。
噬菌體展示技術流程
一般來(lái)說，噬菌體展示技術有以下(xià)5個步驟:
步驟1:構建噬菌體展示庫
重組DNA技術用(yòng)于将外(wài)來(lái)cDNA整合到(dào)病毒DNA中。不同的基因組被插入到(dào)多個噬菌體的基因組中。剪接到(dào)一個外(wài)殼蛋白(bái)的基因中，使該蛋白(bái)顯示在噬菌體顆粒的外(wài)面，而這(zhè)些(xiē)分離的噬菌體隻展示一種蛋白(bái)、肽或抗體。這(zhè)些(xiē)噬菌體的集合即爲庫，如抗體噬菌體庫、蛋白(bái)質噬菌體庫或随機噬菌體庫。
步驟2：結合
這(zhè)些(xiē)庫暴露于選定的目标，隻有一些(xiē)噬菌體會(huì)與目标相互作(zuò)用(yòng)。這(zhè)些(xiē)目标是計(jì)劃識别特定的配體，如固定的蛋白(bái)、細胞表面蛋白(bái)或組織細胞表面蛋白(bái)。
步驟3：洗滌
未結合的噬菌體可以被洗滌緩沖液沖走，隻留下(xià)那些(xiē)對(duì)受體有親和(hé)力的噬菌體。
步驟4：洗脫
洗脫緩沖液洗脫回收對(duì)目标有親和(hé)力的噬菌體
步驟5：放(fàng)大(dà)
展示特異性的洗脫噬菌體被用(yòng)來(lái)感染新的宿主細胞進行擴增，或直接進行細菌感染和(hé)擴增回收的噬菌體。
噬菌體展示技術由于其廣泛的應用(yòng)領域備受關注，這(zhè)就要求廣大(dà)從(cóng)業者在熟悉，掌握噬菌體展示技術的同時(shí)，廣泛的開(kāi)展交流與學習，不斷地在應用(yòng)噬菌體展示這(zhè)一技術的同時(shí)取得新的突破。
