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真核蛋白(bái)表達相信大(dà)家不會(huì)覺得陌生，我們前面和(hé)大(dà)家具體聊過有關真核表達的幾種方式以及其優勢所在：“常見的真核表達系統有哪幾種?它們各自(zì)有哪些(xiē)優勢?”。今天普健生物再和(hé)大(dà)家具體聊聊有關真核表達的步驟以及在表達過程中導緻其表達低(dī)下(xià)的原因。
真核表達，顧名思義，就是利用(yòng)真核細胞進行蛋白(bái)表達的技術服務，通常在需要大(dà)量高(gāo)質量蛋白(bái)的時(shí)候會(huì)采用(yòng)這(zhè)個方式，當然了(le)，藥物開(kāi)發以及生物學研究上(shàng)也(yě)常常會(huì)使用(yòng)到(dào)。
真核表達服務的具體步驟一般如下(xià)：
1、基因克隆。通過基因技術将目的基因克隆到(dào)真核的表達載體當中去;
2、細胞培養。将載體轉染到(dào)真核細胞中，并通過細胞培養的方式對(duì)細胞進行擴增;
3、蛋白(bái)表達。通過操作(zuò)以及環境搭配等手段滿足蛋白(bái)的表達條件，使得目的蛋白(bái)得以表達;;
4、蛋白(bái)純化。通過相關技術對(duì)蛋白(bái)進行純化(具體純化方法可參考“蛋白(bái)純化方法之沉澱法的幾種常用(yòng)方式介紹”);
當然了(le)，不同的蛋白(bái)表達公司因爲技術實力、實驗環境以及儀器使用(yòng)等方面的不同，在表達結果方面會(huì)存在很(hěn)大(dà)的不同，甚至會(huì)出現(xiàn)表達量低(dī)的情況。爲什(shén)麽會(huì)會(huì)發生這(zhè)樣的情況呢(ne)?且聽普健生物和(hé)您具體分析。
一般來(lái)說，導緻蛋白(bái)表達量低(dī)下(xià)的原因有很(hěn)多，主要是如下(xià)幾種：
1、轉染效率低(dī)。在進行細胞轉染時(shí)，有一定的概率會(huì)發生轉染率低(dī)的現(xiàn)象(當然了(le)，也(yě)隻有少數細胞會(huì)出現(xiàn)這(zhè)個情況)，從(cóng)而造成蛋白(bái)表達量降低(dī);
2、基因轉錄水(shuǐ)平低(dī)。一些(xiē)基因的表達會(huì)受到(dào)細胞因子調節的原因，造成表達載體轉錄水(shuǐ)平低(dī)而造成蛋白(bái)表達低(dī)的情況;
3、翻譯後修飾不完整。在進行蛋白(bái)修飾的過程中發生了(le)異常，導緻蛋白(bái)結構不完整，從(cóng)而造成表達量低(dī)的情況;
4、表達的蛋白(bái)不穩定。表達後的蛋白(bái)在溶液中因爲不穩定的情況，出現(xiàn)失活的現(xiàn)象;
5、細胞毒素的影響。細胞産生的毒素造成蛋白(bái)失活;
6、條件不符合。蛋白(bái)表達的環境達不到(dào)要求，造成蛋白(bái)表達量低(dī);
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