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穩定細胞系也(yě)叫穩定細胞表達系，是一種通過将目标基因整合到(dào)宿主細胞中後傳代，保證細胞可以穩定表達的一種細胞表達系統。就目前來(lái)說，穩定細胞系構建的方法主要有三種：慢病毒感染細胞、轉座子介導的穩定細胞系構建以及基因敲入法。今天，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊這(zhè)三種穩定細胞系的構建方法以及相應問題解析。
1、慢病毒感染
我們知(zhī)道(dào)，慢病毒技術可以感染絕大(dà)多數的細胞，而且病毒包裝技術也(yě)是非常的成熟，可以說是穩定細胞系的首選系統。當然了(le)，慢病毒技術也(yě)有着一定的不足之處，比如慢病毒包裝容量有限制，對(duì)于那些(xiē)轉錄區(qū)域較長的基因來(lái)說，其有着極大(dà)的局限性。而且慢病毒爲逆轉錄病毒，對(duì)于部分的基因翻譯有着一定的影響;
2、轉座子介導的穩定細胞株構建
也(yě)叫跳躍基因，通過剪切和(hé)粘貼來(lái)實現(xiàn)DNA片段的高(gāo)效轉移。轉座子其實就是通過編碼轉座酶，将轉座酶基因在基因序列上(shàng)進行整合;
3、基因敲入
采用(yòng)基因技術對(duì)目的基因進行定點敲入，依靠細胞自(zì)身的修複機制完成;
穩定細胞系構建中的常見問題：
1、穩定細胞系構建需要進行密碼子優化嗎?
對(duì)于不同的基因序列來(lái)說，因爲其密碼子的簡易性以及種類、數量上(shàng)面的察覺，想要構建的穩定細胞系長期穩定的表達，密碼子優化是非常必要的;
2、如何選擇合适的啓動子?
對(duì)于不同的制備需求，我們需要設定特定的啓動子。比如CMV啓動子除了(le)在幹細胞外(wài)，其他(tā)大(dà)多數細胞類型中都可以得到(dào)較高(gāo)活性表達;懸浮細胞中采用(yòng)SFFV啓動子會(huì)獲得更高(gāo)的表達活性等;
當然了(le)，對(duì)于穩定表達系的構建來(lái)說，會(huì)遇到(dào)的問題非常的多，很(hěn)多時(shí)候，即便我們嚴格按照制備方式來(lái)執行也(yě)依然可能(néng)會(huì)出現(xiàn)問題。因爲，對(duì)于大(dà)部分的人來(lái)說，穩定細胞系的構建本就是一個龐大(dà)的過程，任何一個小(xiǎo)問題都可能(néng)造成構建的失敗。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供穩定細胞系構建服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
