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2021年06月19日蘇州系統醫(yī)學研究所程根宏課題組和(hé)普健生物(武漢)科技有限公司、十堰市太和(hé)醫(yī)院以及蘇州方科生物有限公司合作(zuò)在Small Methods雜(zá)志在線發表了(le)《Methods to Identify Immunogenic Peptides in SARS-CoV-2 Spike and Protective Monoclonal Antibodies in COVID-19 Patients》研究成果。該論文(wén)發現(xiàn)了(le)一種COV2病毒免疫原性表位和(hé)抗體篩選的新方法。
中和(hé)抗體通過與COV2病毒的S蛋白(bái)結合，可以有效阻止COV2病毒感染細胞。它們既可以用(yòng)于治療感染COV2病毒的患者，也(yě)能(néng)夠作(zuò)爲預防性療法，給易感高(gāo)危人群提供被動免疫能(néng)力。目前雖然已有SARS-CoV-2的中和(hé)抗體被開(kāi)發爲治療藥物，但(dàn)對(duì)于能(néng)診斷COV2病毒以及産生中和(hé)抗體的免疫原性表位尚未清楚。
該研究團隊首先構建表達含25個氨基酸的多肽噬菌體文(wén)庫，這(zhè)些(xiē)多肽覆蓋COV2病毒Spike全長蛋白(bái)，将該噬菌體文(wén)庫與7名COV2患者和(hé)一個具有與其同源性表位結合抗體健康個體的血清混合，再通過Protein A/G磁珠富集與抗體結合的噬菌體文(wén)庫，進行PCR擴增及測序。最終分析得到(dào)3個位于RBM區(qū)的S430-451，S470-481和(hé)S501-515特異性較好(hǎo)的表位。
通過對(duì)不同患者血清中的抗體分布情況以及抗體水(shuǐ)平與臨床狀态的關系研究後，發現(xiàn)對(duì)于COVID-19的中和(hé)活性可能(néng)是由于針對(duì)多種表位的抗體組合而成的。再用(yòng)這(zhè)3種多肽分别免疫小(xiǎo)鼠刺激産生相應抗體後檢測發現(xiàn)，其中S470-486具有較高(gāo)的免疫原性，産生的中和(hé)抗體能(néng)抑制COV2病毒的感染。
爲進一步證明(míng)S470-486肽上(shàng)的抗原表位是否能(néng)識别COV2病毒感染患者體内的中和(hé)抗體，從(cóng)15個COV2患者PBMC中得到(dào)抗體的VH和(hé)VL，構建出了(le) ScFv抗體表達噬菌體文(wén)庫，以生物素标記的S470-486多肽爲誘餌經過3輪淘選富集，從(cóng)庫容量爲8.7x109的ScFv文(wén)庫中得到(dào)了(le)兩株單克隆抗體(R3P1-F8和(hé)R3P2-A9-3)，再将其構建到(dào)含有人IgG1主鏈的表達載體上(shàng)。
最後通過ELISA分析證實了(le)全長的R3P1-F8和(hé)R3P2-A9-3與S470-486多肽的結合能(néng)力。
其中R3P2-A9-3能(néng)有效地阻斷SARS-CoV-2假病毒和(hé)野生型病毒的感染。
該研究不僅發現(xiàn)了(le)新的COV2病毒抗原表位和(hé)中和(hé)抗體，也(yě)建立了(le)一種有效的COV2病毒抗原表位和(hé)中和(hé)抗體篩選的方法。
綜上(shàng)所述，我們可以看(kàn)到(dào)噬菌體展示技術颠覆了(le)傳統的雜(zá)交瘤方法從(cóng)而在短時(shí)間獲得全人重組抗體，爲全人重組抗體提供了(le)一條簡便、快(kuài)捷的基因工(gōng)程抗體制備路線，是全人重組抗體制備發展史上(shàng)重要的轉折點，未來(lái)在抗體藥物的研發和(hé)生産中會(huì)愈發地受到(dào)重視(shì)。當然，關于該方法的篩選效率、安全性和(hé)臨床應用(yòng)的潛力還要更多的研究去驗證。
本項研究工(gōng)作(zuò)中噬菌體文(wén)庫的構建、淘選、重組抗體表達純化均由普健生物完成。普健生物具有千億級全人重組抗體庫和(hé)近千億級天然納米抗體庫，可以爲您提供最專業的噬菌體展示技術服務。
