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在雜(zá)交瘤細胞制備的過程中，雖然篩選出來(lái)的雜(zá)交瘤細胞能(néng)夠通過冷凍保存，但(dàn)是依然存在細胞失活的風(fēng)險。所以，爲了(le)克服雜(zá)交瘤細胞保存的問題，我們常常會(huì)選擇對(duì)雜(zá)交瘤細胞進行測序，能(néng)夠快(kuài)速且準确地進行後期的抗體制備。今天，普健生物和(hé)大(dà)家具體聊聊有關雜(zá)交瘤細胞測序的具體步驟和(hé)應用(yòng)。
雜(zá)交瘤細胞測序的具體步驟：
1、雜(zá)交瘤細胞培養。先取出雜(zá)交瘤細胞進行複蘇，然後在37度的環境下(xià)培養10天，至細胞生長旺盛時(shí)再收集細胞;
2、mRNA提取。裂解細胞後加入氯仿，離心15分鐘(zhōng)後提取上(shàng)清液。取上(shàng)清液并加入異丙醇離心10分鐘(zhōng)，取沉澱洗淨，晾幹後加入适量DEPC溶解;
3、轉率cDNA。選擇合适的反應體系進行擴增，合成cDNA第一條鏈，而後根據已知(zhī)的cDNA合成第二條鏈;
4、獲得可變區(qū)基因。對(duì)cDNA進行擴增，獲得輕鏈/重鏈可變區(qū)基因;
5、抗體測序。對(duì)基因進行陽性克隆并測序;
6、分析測序結果。通過生物信息學分析，得到(dào)抗體序列;
雜(zá)交瘤細胞測序的優勢：
雜(zá)交瘤測序可以更爲準确地進行質譜分析，能(néng)夠提供更加準确且可靠的結果;
雜(zá)交瘤細胞測序的應用(yòng)：
1、用(yòng)于進行相關基因測序的專利性保護;
2、用(yòng)于保存測序信息，防止雜(zá)交瘤細胞丢失單抗信息;
3、用(yòng)于表達純度更高(gāo)的重組單克隆抗體;
4、縮短雜(zá)交瘤細胞克隆的耗時(shí)過程，加速單克隆抗體生産;
5、提升單抗親和(hé)力;
6、構建嵌合抗體以及抗體人源化;
雜(zá)交瘤抗體測序能(néng)夠帶來(lái)的好(hǎo)處是毋庸置疑的，不僅能(néng)夠有效降低(dī)抗體制備的批次性差異問題，更是能(néng)夠在極大(dà)程度上(shàng)提升抗體的親和(hé)力。當然了(le)，測序的過程相對(duì)來(lái)說要複雜(zá)一些(xiē)，需要一定的技術支持。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供雜(zá)交瘤抗體測序服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
