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利用(yòng)兔單B細胞技術制備高(gāo)親和(hé)力、多種表位的抗獨特型單克隆抗體

發表時(shí)間:2023-11-02 訪問次數:231

治療性抗體這(zhè)一類藥物的迅速發展勢如破竹,獨具四大(dà)特性:高(gāo)親和(hé)力、專一性強、半衰期長以及藥理(lǐ)學效力強大(dà)。這(zhè)些(xiē)特性猶如生命的綠色通道(dào),使得治療性抗體成爲了(le)開(kāi)發針對(duì)多種人類疾病的有效治療方法的成熟平台。它們的應用(yòng)領域廣泛,不僅限于标準的免疫球蛋白(bái)G (IgG)格式,還可以擴展到(dào)抗體片段(scFv, VHH)、藥物偶聯物以及雙特異性等新型格式的“不可藥物化”靶點,充分展現(xiàn)了(le)其應用(yòng)的多樣性。随着衆多抗體治療藥物的研發不斷進入臨床前開(kāi)發和(hé)臨床試驗階段,這(zhè)些(xiē)項目對(duì)高(gāo)質量的關鍵生物分析試劑的需求愈加嚴格。在這(zhè)種情況下(xià),抗獨特型試劑抗體(anti-IDs)已成爲臨床前和(hé)臨床階段生物分析應用(yòng)的優選方案之一,常用(yòng)的制備方法包括雜(zá)交瘤技術、噬菌體展示免疫抗體庫或合成抗體庫以及單個B細胞技術

兔單抗以其高(gāo)親和(hé)力和(hé)多樣性在基礎研究和(hé)藥物研發中頗受青睐。兔單抗與傳統的雜(zá)交瘤鼠單抗相比具有更好(hǎo)的抗原識别功能(néng)。由于兔骨髓瘤細胞株受專利保護,無法利用(yòng)雜(zá)交瘤技術開(kāi)發兔單抗,普健生物建立了(le)噬菌體展示抗體文(wén)庫技術平台以及新型的 XtenTM Mab Single B兔單克隆抗體開(kāi)發技術平台。

單個B細胞抗體制備技術是近年來(lái)新發展的一類快(kuài)速制備單克隆抗體的技術,是根據每一個 B細胞隻含有一個功能(néng)性重鏈可變區(qū)DNA序列和(hé)一個輕鏈可變區(qū)DNA序列,以及每一個B細胞隻産生一種特異性抗體的特性,從(cóng)免疫動物脾組織或外(wài)周血中分離抗原特異性B細胞,通過單細胞PCR技術從(cóng)分泌抗體的單個B細胞中擴增IgG重鏈和(hé)輕鏈可變區(qū)基因,然後在哺乳動物細胞内表達并獲得具有生物活性的單克隆抗體。

高(gāo)特異性:與小(xiǎo)鼠和(hé)其他(tā)齧齒動物相比,兔免疫系統更優秀,産生的抗體特異性更強,親和(hé)力更高(gāo)
高(gāo)穩定性:與常規小(xiǎo)鼠生産的單克隆抗體相比,兔IgG結構穩定性高(gāo)
高(gāo)親和(hé)力:兔的B細胞成熟過程産生的親和(hé)力是齧齒動物的10-100
高(gāo)多樣性:兔擁有豐富的B細胞反應庫,其産生的抗體在表位變異、突變、構象變化等方面優勢顯著,且多樣性高(gāo)

案例展示


Elisa binding o f Anti-pembrolizumab Antibody,pAbRabbit with pembrolizumab coating Antigen:
pembrolizumab1ug/mL
Anti-pembrolizumab Antibody,pAbRabbit dilution from 1000ng/mL EC50=9.566ng/mL


研究人員利用(yòng)單個B細胞技術制備了(le)抗獨特型抗體anti-IDs通過兔抗體分子克隆、序列分析和(hé)表達、兔抗體結合親和(hé)力和(hé)表位表征等進行驗證,這(zhè)種具有高(gāo)度Ab1-CDRs特異性和(hé)更多樣化表位的高(gāo)親和(hé)力抗獨特型抗體anti-IDs,爲支持重組治療性抗體項目的生物分析項目提供了(le)切實的好(hǎo)處。


抗獨特型抗體anti-IDs表位類型表征







參考文(wén)獻
WeiYu Lin,Rapid identification of anti-idiotypic mAbs with high affinity and diverse epitopes by rabbit single B-cell sorting-culture and cloning technology,PLoS One,December 21, 2020