基于兔免疫抗體庫制備兔單克隆抗體

作(zuò)爲靶向特異性抗體的來(lái)源，兔比小(xiǎo)鼠具有獨特的優勢。它們産生的親和(hé)力抗體高(gāo)于小(xiǎo)鼠，并可能(néng)針對(duì)小(xiǎo)鼠免疫原性差或耐受差的抗原或表位引發強烈的免疫反應。然而，由于小(xiǎo)鼠融合夥伴細胞系的廣泛應用(yòng)，以及成熟的融合和(hé)克隆小(xiǎo)鼠雜(zá)交瘤的工(gōng)具和(hé)方案，目前絕大(dà)多數單克隆抗體來(lái)源于小(xiǎo)鼠。噬菌體展示技術篩選抗體庫是一種替代雜(zá)交瘤技術制備特異性單克隆抗體的方法。利用(yòng)免疫動物的B細胞構建抗體文(wén)庫，通過噬菌體展示技術對(duì)抗體文(wén)庫進行篩選，可以獲得高(gāo)親和(hé)力的非鼠源單克隆抗體。

基于噬菌體展示技術的兔免疫Fab庫的建立，可以方便地分離兔單克隆抗體。免疫後，從(cóng)動物脾髒中提取B細胞cDNA，通過PCR擴增抗體可變域庫并組裝成Fab庫。然後将Fab基因克隆到(dào)噬菌體載體并轉化到(dào)大(dà)腸杆菌，完成兔免疫Fab基因文(wén)庫的構建。該文(wén)庫可針對(duì)免疫抗原進行生物篩選，用(yòng)于快(kuài)速鑒定高(gāo)親和(hé)力、靶向特異性的兔單克隆抗體。

抗體庫是編碼特性未知(zhī)抗體的抗體基因的巨大(dà)集合（通常大(dà)于10¹⁰）。抗體庫是通過噬菌體展示和(hé)其他(tā)體外(wài)選擇技術來(lái)發現(xiàn)抗體的重要來(lái)源，其設計(jì)是成功發現(xiàn)抗體的關鍵。抗體庫的類型包括随機肽庫、免疫庫和(hé)天然庫。

随機肽庫：将化學合成的随機寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白(bái)基因融合，在噬菌體表面表達出各種氨基酸組合的随機序列短肽。利用(yòng)噬菌體展示随機肽庫可以高(gāo)通量篩選各種抗原的抗原表位

免疫庫：免疫庫由經過免疫(包括疫苗注射、微生物感染、自(zì)身免疫疾病、腫瘤等)後的供體B淋巴細胞的抗體基因構建。對(duì)于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高(gāo)，但(dàn)一般僅适用(yòng)于一種特異性抗體的選擇，庫容量要求不高(gāo)，一般10⁶-10⁸的庫容量就可滿足需要

天然庫：采用(yòng)不經免疫的人或動物來(lái)源的外(wài)周血淋巴細胞、骨髓、脾細胞的B細胞作(zuò)爲材料，進行基因擴增，但(dàn)親和(hé)力通常較低(dī)。骨髓内和(hé)骨髓外(wài)所有抗體基因都包含在内，所構建的抗體庫适用(yòng)于所有抗原所對(duì)應的抗體的選擇，庫容量要求較高(gāo)，最小(xiǎo)需要達到(dào) 10⁹，因爲目前估算(suàn)的自(zì)然界的抗原種類在這(zhè)個數量級上(shàng)

普健生物構建了(le)千億級别、高(gāo)親和(hé)力全人源重組天然抗體文(wén)庫，經過驗證，任意靶點從(cóng)文(wén)庫中直接篩選，一般可以獲得十幾個到(dào)上(shàng)百個高(gāo)親和(hé)力的克隆，其親和(hé)力、特異性都達到(dào)行業領先水(shuǐ)平。

優勢：
1.序列正确性高(gāo)，現(xiàn)階段庫容已達近千億級别（10¹¹pfu)。
2.兩步法建庫，先連入輕鏈再連入重鏈，将來(lái)自(zì)全世界不同地區(qū)人種來(lái)源的輕鏈和(hé)重鏈随機組合，保證了(le)庫的高(gāo)質量和(hé)多樣性。
3.分爲κ和(hé)λ兩種輕鏈亞型的單鏈抗體庫，與大(dà)多數商業化混合庫不同，即可用(yòng)于篩選κ型抗體，也(yě)可用(yòng)于篩選λ型的高(gāo)親和(hé)力抗體。
4.帶有His标簽，可直接用(yòng)phagemid表達抗體，His标簽純化


 

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