雞HNF 3β重組蛋白(bái)在大(dà)腸杆菌中的高(gāo)效表達及其抗體制備

肝核因子3β (hepatocyte nuclear factor 3β, HNF 3β)作(zuò)爲一個重要的轉錄調控因子，參與哺乳動物的前腸胚和(hé)肝髒發育以及成體肝内的能(néng)量代謝(xiè)，而HNF 3β在雞(Gallus gallus)中的功能(néng)還不清楚。

肝細胞核因子(hepatocyte nuclear factor, HNF)包含HNF1、HNF2、HNF3、HNF4、HNF6和(hé)“CCAT”增強子結合蛋白(bái)，形成一個轉錄網絡，調控肝細胞的分化，在胚胎發育和(hé)肝内代謝(xiè)平衡中發揮重要作(zuò)用(yòng)。HNF 3β又稱Forkheadbox A2 (FOXA2)，是轉錄調控因子3家族的一員，協同HNF 3α(FOXA1)促進前腸内胚層的建立和(hé)啓動肝髒的發育；HNF 3β對(duì)成年小(xiǎo)鼠(Mus musculus)肝内葡萄糖和(hé)脂類的平衡有着重要作(zuò)用(yòng)；HNF 3β缺陷還會(huì)影響胚泡着床和(hé)基質細胞蛻膜化，造成完全不育。

目前大(dà)腸杆菌(Escherichia coli)表達系統是原核表達體系中最早被應用(yòng)、也(yě)是最爲成熟和(hé)應用(yòng)最廣的一種工(gōng)程性表達外(wài)源蛋白(bái)的體系，其具有宿主細胞增殖速度快(kuài)、操作(zuò)方便、誘導調控表達機制清晰可控及外(wài)源蛋白(bái)産量高(gāo)等優勢。目前關于雞HNF 3β的功能(néng)還知(zhī)之甚少，特别是HNF 3β在繁育和(hé)能(néng)量代謝(xiè)方面是否也(yě)具有重要作(zuò)用(yòng)？這(zhè)是值得去研究和(hé)弄清楚的問題。而雞HNF 3β有效抗體的缺乏，限制了(le)對(duì)其功能(néng)的研究。爲此，來(lái)自(zì)常熟理(lǐ)工(gōng)學院的研究人員以大(dà)腸杆菌進行工(gōng)程性表達雞HNF 3β重組蛋白(bái)，并制備其抗體，爲進一步研究雞HNF 3β與靶基因的互作(zuò)作(zuò)用(yòng)、揭示其功能(néng)提供重要的物質基礎。

本研究中，研究人員通過優化合成了(le)雞Hnf 3β基因編碼區(qū)片段，以pET 30a表達載體在大(dà)腸杆菌(Escherichia coli)中進行重組蛋白(bái)HNF 3β的表達，用(yòng)6 mol/L尿素變性包涵體，Ni2+對(duì)重組蛋白(bái)進行親和(hé)層析，并以快(kuài)速稀釋法複性重組蛋白(bái)，以離心超濾法收集、濃縮目的蛋白(bái)；取純化的HNF 3β重組蛋白(bái)和(hé)弗氏佐劑乳化後免疫兔(Oryctolagus cuniculus)，制備雞HNF 3β的抗血清，以酶聯免疫吸附測定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測定抗血清效價後，用(yòng)Protein A法純化抗體；通過檢測雞肝癌細胞系(leghorn male hepatoma, LMH)中HNF 3β蛋白(bái)的表達情況驗證所制備抗體的效果。

這(zhè)項研究根據大(dà)腸杆菌對(duì)密碼子的偏愛性優化了(le)雞Hnf 3β基因的編碼區(qū)片段序列，該優化的片段。提高(gāo)了(le)雞HNF 3β重組蛋白(bái)在大(dà)腸杆菌中的表達，快(kuài)速稀釋複性蛋白(bái)的方法能(néng)有效地從(cóng)包涵體中獲得高(gāo)純度的可溶性HNF 3β重組蛋白(bái)；純度95%以上(shàng)的重組蛋白(bái)免疫新西蘭大(dà)白(bái)兔獲得了(le)較高(gāo)效價的多克隆抗體，Protein A一步法制備、純化了(le)HNF3β的多克隆抗體，抗體對(duì)HNF 3β蛋白(bái)具有較高(gāo)的特異性和(hé)效價，可利用(yòng)此抗體檢測雞HNF 3β蛋白(bái)分子及研究HNF 3β的功能(néng)。


參考文(wén)獻
[1]張景,潘玲,毛威威等.雞HNF 3β重組蛋白(bái)在大(dà)腸杆菌中的高(gāo)效表達及其抗體制備[J].農(nóng)業生物技術學報(bào),2022,30(04):809-816.