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在蛋白(bái)表達過程中出現(xiàn)失敗的情況是很(hěn)正常的，有很(hěn)多人天天泡論壇，天天做實驗，但(dàn)是蛋白(bái)表達的成功率依然不是很(hěn)高(gāo)，這(zhè)是爲什(shén)麽呢(ne)?采用(yòng)哺乳動物表達系統來(lái)表達蛋白(bái)，能(néng)夠客服修飾蛋白(bái)表達的問題，而且能(néng)夠實現(xiàn)高(gāo)度人源化，可用(yòng)于結構、功能(néng)分析等。
哺乳動物表達系統最常用(yòng)的兩個方式是瞬時(shí)表達和(hé)穩定轉染。穩定轉染也(yě)就是我們常說的穩定細胞系構建，表達原理(lǐ)就是将外(wài)源基因轉染到(dào)細胞染色體生，讓其可以長期穩定地生産蛋白(bái)。雖然說生産的蛋白(bái)質量高(gāo)且設計(jì)性強，但(dàn)是，價格相對(duì)較高(gāo)，周期長，操作(zuò)難度也(yě)相對(duì)較大(dà)。所以，我們常用(yòng)瞬時(shí)轉染來(lái)進行表達。
那麽，如何提升瞬時(shí)表達的效率呢(ne)?
方法一：編碼優化
根據應用(yòng)設計(jì)出最佳編碼序列，同時(shí)爲其選擇最合适的表達載體，這(zhè)樣，就能(néng)在極大(dà)程度上(shàng)提升蛋白(bái)表達的成功率。也(yě)就是說，我們在開(kāi)始蛋白(bái)表達之前，使用(yòng)密碼子優化算(suàn)法，計(jì)算(suàn)出合适的編碼序列，這(zhè)樣可以節約時(shí)間、精力和(hé)成本;
方法二：提升溶解液濃度
很(hěn)多時(shí)候，我們用(yòng)來(lái)溶解蛋白(bái)的溶液濃度相對(duì)較低(dī)，使得蛋白(bái)表達量低(dī)，所以，出現(xiàn)這(zhè)種問題的時(shí)候，我們可以考慮适當提升一下(xià)溶解液的濃度;
方法三：搭配融合伴侶
我們可以适當地在重組蛋白(bái)中添加短肽序列，也(yě)就是我們常說的蛋白(bái)标簽。這(zhè)種方法可以有效地提升蛋白(bái)的表達效率，而後再用(yòng)酶切技術或者化學試劑去除掉标簽;
方法四：純化優化
根據上(shàng)下(xià)遊蛋白(bái)需求和(hé)純度的不同，設計(jì)出不同的純化方法。比如蛋白(bái)表達量高(gāo)，就可以考慮使用(yòng)一步式親和(hé)純化。如果需要進一步地純化，則可以進行分子排阻色譜，如果在這(zhè)個基礎上(shàng)需要繼續純化的話(huà)，則可以考慮使用(yòng)更高(gāo)的純化方式;
總的來(lái)說，通過如上(shàng)的四種方法可以在極大(dà)程度上(shàng)提升蛋白(bái)表達的效率及成功率，當然了(le)，在日常實驗中，需要結合實際情況來(lái)選擇合适的方法。同時(shí)，我們在做實驗的時(shí)候，需要多注意一些(xiē)細節方面的問題，比如溫度控制、PH值等等，這(zhè)些(xiē)細節都做好(hǎo)了(le)，就能(néng)夠在更大(dà)程度上(shàng)保障實驗的成功率。更多蛋白(bái)表達的知(zhī)識，敬請(qǐng)關注普健生物。
