聯系我們
在單克隆抗體制備的過程中，雜(zá)交瘤細胞的制備可謂重中之重，它的重要性自(zì)然不言而喻。但(dàn)是，雜(zá)交瘤細胞的篩選則關系到(dào)我們産生蛋白(bái)的質量以及相關成本問題。在單克隆抗體制備的過程中，我們需要進行兩次雜(zá)交瘤細胞的篩選，方法各不相同。下(xià)面，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。
第一次篩選：
淋巴B細胞和(hé)骨髓細胞融合後即産生雜(zá)交瘤細胞，之後的選擇性培養可謂第一次篩選成功與否的關鍵。一般我們會(huì)選擇HAT培養液進行普通細胞的培養，一般采用(yòng)兩條途徑：
1、生物合成途徑(D途徑)。通過氨基酸和(hé)其他(tā)小(xiǎo)分子融合成的原料來(lái)供應DNA分子的合成，其中也(yě)算(suàn)作(zuò)爲輔酶參與這(zhè)個過程，氨基蝶呤則會(huì)阻斷DNA合成，這(zhè)個過程也(yě)就是我們常說的D途徑;
2、應急途徑(S途徑)。利用(yòng)次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸酐轉移酶和(hé)胸腺嘧啶核糖核苷酸催化黃嘌呤和(hé)胸腺嘧啶合成相應的核苷酸;
未融合的細胞在D途徑中會(huì)被氨基蝶呤阻斷，會(huì)因爲缺乏繁殖能(néng)力而死亡;在S途徑中會(huì)因爲自(zì)身不具備S途徑而死亡;
第二次篩選：
一般采用(yòng)有限稀釋克隆下(xià)撥的方法，将細胞多倍稀釋後接種在細胞培養闆上(shàng)，其上(shàng)清液可與特定抗原結合的标記爲陽性孔。陽性孔中的細胞需要再次進行有限稀釋操作(zuò)，3-4次後，即可确認其中的細胞爲單克隆抗體。一般來(lái)說，第二次篩選的過程也(yě)是一個鑒定的過程。
總的來(lái)說，雜(zá)交瘤細胞的篩選需要進行4-5次，這(zhè)樣才能(néng)保證制備出來(lái)的細胞是合格的細胞，通過培養，産生的單克隆抗體才是我們需要的。但(dàn)是這(zhè)種方式制備出來(lái)的抗體因爲外(wài)部條件的變化，會(huì)導緻不同批次生産出來(lái)的抗體存在着一定的差異。所以，如果需要多次生産同樣的抗體的話(huà)，我們需要構建穩定細胞株來(lái)進行制備。更多有關單克隆抗體制備方面的知(zhī)識，敬請(qǐng)關注武漢普健生物。
