聯系我們
重組蛋白(bái)表達實驗中，即便是完全按照自(zì)己設計(jì)的程序來(lái)操作(zuò)，也(yě)可能(néng)會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問題，隻要這(zhè)些(xiē)問題出現(xiàn)，基本上(shàng)就代表我們的實驗沒成功。其實，實驗做多了(le)之後，這(zhè)種問題可以說是非常的普遍。有鑒于此，普健生物就和(hé)大(dà)家總結一下(xià)有關重組蛋白(bái)表達過程中常見的一些(xiē)表達異常的情況及其解決辦法。
1、密碼子位移。外(wài)源基因序列内部核糖體結合位點出現(xiàn)偏移，或者受到(dào)一些(xiē)其他(tā)因素幹擾，導緻密碼子出現(xiàn)位移的情況;
2、稀有子密碼問題。我們可以使用(yòng)相關軟件對(duì)稀有子密碼進行分析，在進行重組表達之前，對(duì)蛋白(bái)序列進行優化。我們紙(zhǐ)袋，在蛋白(bái)表達起始位點前的15個氨基酸密碼子至關重要，連續的兩個稀有子密碼可能(néng)會(huì)造成表達效率降低(dī)的情況。所以，我們可以通過對(duì)其進行優化，避免如上(shàng)可能(néng)會(huì)出現(xiàn)的問題後再進行表達;
3、信号肽表達問題。一般來(lái)說，大(dà)腸杆菌缺乏加工(gōng)蛋白(bái)信号肽的機制，所以，我們在進行相關真核表達時(shí)候，需要引起額外(wài)的注意;
4、GC含量高(gāo)問題。一般來(lái)說，基因序列中GC含量超過70%的時(shí)候，就很(hěn)難進行蛋白(bái)表達了(le)，想要表達成功，我們隻能(néng)進行相關優化工(gōng)作(zuò)，降低(dī)其中GC含量後再表達;
5、蛋白(bái)大(dà)小(xiǎo)異常問題。小(xiǎo)于10KD或者大(dà)于100KD的蛋白(bái)都難以表達，如果遇到(dào)這(zhè)種蛋白(bái)，可考慮使用(yòng)其他(tā)辦法;
6、蛋白(bái)标簽選擇問題。通常我們需要在蛋白(bái)表達中加入各種标簽，可一些(xiē)标簽會(huì)影響蛋白(bái)表達，甚至造成蛋白(bái)表達不成功。這(zhè)個時(shí)候，我們就需要考慮采用(yòng)一些(xiē)易于表達的标簽，不要選擇難以表達的标簽;
在重組蛋白(bái)表達的過程中，我們常常會(huì)遇到(dào)這(zhè)樣或者那樣的問題，一般來(lái)說，我們隻需要根據實驗的要求來(lái)進行，都不會(huì)出現(xiàn)什(shén)麽問題。牢記如上(shàng)的六點，在表達過程中多注意相關情況，相信蛋白(bái)表達失敗的概率不會(huì)太高(gāo)。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
