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之前我們和(hé)大(dà)家聊過有關重組蛋白(bái)表達因爲設計(jì)問題而導緻的表達異常情況，可以說，它是蛋白(bái)表達失敗很(hěn)重要的一個原因。今天，我們再和(hé)大(dà)家聊聊有關因爲操作(zuò)方面失誤而導緻的相關問題，希望對(duì)大(dà)家的實驗有所幫助。
其實，重組蛋白(bái)表達失誤的情況并不少見，隻要注意如下(xià)幾點，一般都不成問題。
1、質粒構建問題。當我們在完成質粒構建後，除了(le)普通的酶切鑒定和(hé)PCR鑒定外(wài)，還需要進行質粒的測序工(gōng)作(zuò)，隻有在确保無任何突變的情況下(xià)，我們才能(néng)對(duì)其進行下(xià)一步實驗。當然了(le)，出現(xiàn)序列缺失或多餘的情況就更不能(néng)進行實驗了(le);
2、宿主菌确定。在進行表達之前，我們需要确定宿主菌是正确可用(yòng)的，如果有問題，則會(huì)直接造成表達失敗;
3、蛋白(bái)降解問題。一般來(lái)說，宿主菌内存在很(hěn)多蛋白(bái)酶，它會(huì)造成蛋白(bái)的降解。所以，很(hěn)多情況下(xià)，并不是蛋白(bái)沒有表達，而是表達出來(lái)後又被降解了(le)，這(zhè)樣，也(yě)很(hěn)難讓我們檢測到(dào)蛋白(bái)的存在。一般這(zhè)個時(shí)候，我們需要加入一些(xiē)藥劑來(lái)抑制蛋白(bái)酶的産生;
4、培養基問題。選錯培養基，或者選擇的培養基營養液錯誤，也(yě)可能(néng)會(huì)造成表達失敗(選擇合适的培養基即可);
5、分子異常情況。蛋白(bái)的分子量或大(dà)小(xiǎo)等相關因素與預期偏差較大(dà)，這(zhè)個可以說是因爲設計(jì)或者中間過程出現(xiàn)了(le)偏差導緻，我們需要進行相關分析後再次進行表達;
總的來(lái)說，因爲操作(zuò)錯誤導緻蛋白(bái)表達異常的情況還是比較多的，這(zhè)就要求我們在日常實驗中多注重細節問題，隻有做好(hǎo)了(le)這(zhè)些(xiē)方面的工(gōng)作(zuò)，才能(néng)保證重組蛋白(bái)的高(gāo)效表達。當然了(le)，影響蛋白(bái)表達的因素還有很(hěn)多，這(zhè)就需要我們做好(hǎo)各類檢測工(gōng)作(zuò)，隻有達到(dào)了(le)相應的需求後，才能(néng)進一步保障實驗的成功率。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
