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對(duì)于新手來(lái)說，昆蟲細胞蛋白(bái)表達中常常會(huì)遇到(dào)各種各樣的問題，這(zhè)些(xiē)問題在看(kàn)前輩們做實驗的時(shí)候完全感覺不到(dào)，可是當自(zì)己親自(zì)操作(zuò)的時(shí)候，往往就會(huì)浮現(xiàn)。那麽，昆蟲細胞蛋白(bái)表達中一般會(huì)遇到(dào)哪些(xiē)問題呢(ne)?今天普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。
1、哪類蛋白(bái)适合選擇昆蟲蛋白(bái)表達?
對(duì)于一些(xiē)表達相對(duì)困難的蛋白(bái)都可以考慮用(yòng)昆蟲來(lái)表達，比如：激酶、昆蟲來(lái)源蛋白(bái)、糖蛋白(bái)、衣殼蛋白(bái)、膜蛋白(bái)等;
2、昆蟲蛋白(bái)表達是用(yòng)昆蟲嗎?
昆蟲表達并非用(yòng)昆蟲來(lái)表達，而是通過培養昆蟲細胞，用(yòng)細胞來(lái)表達蛋白(bái);
3、目的基因是否整合到(dào)昆蟲細胞基因中?
昆蟲表達并不會(huì)将目的基因整合到(dào)昆蟲基因中，而是在特定的條件下(xià)，用(yòng)杆狀病毒攜帶目的基因去侵染昆蟲細胞，而後利用(yòng)宿主的環境進行自(zì)我複制，從(cóng)而獲得相應蛋白(bái);
4、昆蟲蛋白(bái)表達是否對(duì)蛋白(bái)大(dà)小(xiǎo)有要求?
對(duì)于大(dà)小(xiǎo)在10kd-100kd的蛋白(bái)适合于任何表達系統，110dk-250kd這(zhè)類大(dà)蛋白(bái)則首選昆蟲表達系統;
5、衣殼蛋白(bái)表達後如何純化?
一般來(lái)說，衣殼蛋白(bái)都較難純化，主要是因爲其可溶性不好(hǎo)、不挂柱、容易形成聚合體等問題。我們通常會(huì)采用(yòng)多種純化方式來(lái)進行綜合提純，這(zhè)樣才能(néng)在一定程度上(shàng)達到(dào)純化的目的;
6、目的蛋白(bái)表達後會(huì)和(hé)病毒一起釋放(fàng)出來(lái)嗎?
目的蛋白(bái)是否會(huì)釋放(fàng)到(dào)細胞外(wài)主要由蛋白(bái)的特性決定，當然了(le)，信号肽也(yě)在一定程度上(shàng)有着一定的影響，一般來(lái)說，蛋白(bái)都會(huì)釋放(fàng)到(dào)細胞外(wài)。當然了(le)，有一些(xiē)特殊情況，需要特殊對(duì)待;
7、如何保存蛋白(bái)?
一般來(lái)說，爲了(le)保護其中的病毒，我們需要加入2%培養基級别的BS或胎牛血清，在4度或負80度的環境中保存;
事(shì)實上(shàng)能(néng)夠影響到(dào)蛋白(bái)特性的因素有很(hěn)多，而且不同的蛋白(bái)所需環境也(yě)是各不相同的。所以，我們在進行相關蛋白(bái)實驗的時(shí)候，需要結合實際情況來(lái)進行選擇。武漢普健生物作(zuò)爲一家專業的蛋白(bái)制備公司，專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供昆蟲蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
