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噬菌體展示技術在新藥研發方面有着廣泛的使用(yòng)，在之前我們和(hé)大(dà)家聊過有關噬菌體的相關隻是，大(dà)家可以點擊“什(shén)麽是噬菌體展示技術?它的主要作(zuò)用(yòng)有哪些(xiē)?”去詳細了(le)解一下(xià)。後來(lái)有很(hěn)多客戶問到(dào)有關噬菌體展示文(wén)庫構建方面的知(zhī)識，有鑒于此，我們在這(zhè)裏統一和(hé)大(dà)家聊一聊。
什(shén)麽是噬菌體展示文(wén)庫構建?
我們知(zhī)道(dào)，噬菌體展示技術就是通過将外(wài)源基因插入到(dào)噬菌體蛋白(bái)外(wài)殼基因的适當位置，讓其随着噬菌體的傳代，在子代噬菌體表面得到(dào)展示，而後通過篩選和(hé)淘選的過程後，獲得我們所需蛋白(bái)的方式。而噬菌體展示文(wén)庫則是多種不同外(wài)源基因噬菌體的集合。
如何構建噬菌體展示文(wén)庫?
1、淘選
利用(yòng)靶點抗原或者細胞組織和(hé)噬菌體文(wén)庫作(zuò)用(yòng)，淘選出能(néng)夠和(hé)靶點特異性結合或者功能(néng)的展示噬菌體，洗脫下(xià)來(lái)擴增，經過兩到(dào)五輪淘選，富集和(hé)擴增陽性噬菌體文(wén)庫 。
2、篩選
對(duì)陽性噬菌體文(wén)庫進行單克隆挑選，通過高(gāo)通量的測序和(hé)功能(néng)學實驗(ELISA)确定單一的能(néng)夠和(hé)靶點抗原蛋白(bái)結合的抗體片段的蛋白(bái)序列和(hé)基因序列 。
噬菌體文(wén)庫構建的一般流程
1、提取所需RNA或mRNA;
2、對(duì)多色RNA或mRNA進行反轉錄，獲得第一鏈cDNA;
3、通過多個引物，将cDNA庫中的輕重鏈複制并擴增出來(lái);
4、在引物上(shàng)增加酶切位點，再次擴增出cDNA中的輕重鏈;
5、利用(yòng)技術手段将輕鏈基因和(hé)重鏈基因拼接到(dào)一起;
6、将拼接的輕重鏈整合到(dào)噬菌體質粒上(shàng);
7、擴增建立噬菌體TG1庫;
8、通過進一步擴增和(hé)純化，獲得噬菌體文(wén)庫;
噬菌體文(wén)庫的質量主要有文(wén)庫的大(dà)小(xiǎo)、文(wén)庫抗體可變區(qū)的多樣性、基因片段層次分步等方面，所以，我們在判斷一個噬菌體文(wén)庫好(hǎo)壞時(shí)，完全可以從(cóng)這(zhè)幾個方面入手查看(kàn)。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供噬菌體文(wén)庫構建服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
