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在蛋白(bái)表達過程中，常常會(huì)遇到(dào)這(zhè)樣或那樣的問題，這(zhè)些(xiē)問題會(huì)在極大(dà)程度上(shàng)影響到(dào)蛋白(bái)表達的結果。無論是五大(dà)表達系統中的哪種，總會(huì)在操作(zuò)過程中出現(xiàn)問題。那麽，蛋白(bái)表達過程中會(huì)遇到(dào)哪些(xiē)問題?如何規避這(zhè)些(xiē)問題呢(ne)?今天，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。
1、載體構建錯誤
其實這(zhè)是一個新人常常會(huì)犯的錯誤，在克隆時(shí)弄錯讀碼框，導緻蛋白(bái)無法表達。所以，在構建載體的時(shí)候，需要考慮好(hǎo)啓動子、多克隆抗體位點終止子等等各方面的因素;
2、宿主菌選擇不當
對(duì)于不同的宿主菌來(lái)說，其表達表達載體是各不相同的，對(duì)于一些(xiē)特殊的載體來(lái)說，甚至無法表達。一般在蛋白(bái)表達時(shí)，需要選擇合适的載體;
3、密碼子優化
對(duì)密碼子進行優化，比如研究密碼子的偏愛性以及密碼子的使用(yòng)頻率，對(duì)密碼子進行優化;
3、mRNA的穩定性
mRNA的穩定性直接影響到(dào)轉錄水(shuǐ)平和(hé)翻譯水(shuǐ)平，甚至對(duì)于那些(xiē)擁有稀有密碼子的mRNA來(lái)說，可能(néng)造成其表達問題;
4、基因突變
堿基的缺失、插入或突變都有可能(néng)造成蛋白(bái)的翻譯問題，所以，在進行表達前，一定要通過測序來(lái)避免這(zhè)種情況的發生;
操作(zuò)過程中，有哪些(xiē)問題可以規避掉?
1、可溶蛋白(bái)如何獲取?
可以選擇表達量不高(gāo)的蛋白(bái)表達系統，或者是選這(zhè)有助于可溶性表達的融合蛋白(bái)表達系統;
2、什(shén)麽溫度使得蛋白(bái)溶解度更大(dà)?
據統計(jì)，在37度環境下(xià)制備的蛋白(bái)容易生成包涵體，而30度環境下(xià)容易産生可溶性和(hé)活性都高(gāo)的蛋白(bái)。當然了(le)，對(duì)于一些(xiē)特殊的蛋白(bái)來(lái)說，15-20度的環境下(xià)蛋白(bái)産量最大(dà);
3、包涵體、内毒素如何規避?
選擇合适的蛋白(bái)表達系統即可，一般來(lái)說，在環境配置合适的情況下(xià)，就能(néng)更好(hǎo)地規避包涵體和(hé)内毒素的形成;
總的來(lái)說，在蛋白(bái)表達的過程中，我們需要面對(duì)的問題有很(hěn)多，一些(xiē)細節方面的問題也(yě)更需要引起注意。所以，我們選擇好(hǎo)合适的表達系統，配置好(hǎo)相應的環境，并做好(hǎo)包涵體和(hé)内毒素的規避，這(zhè)樣就能(néng)獲得更加合适的蛋白(bái)産品。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
