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重組蛋白(bái)表達過程中，合适的技術路線會(huì)讓整個實驗過程事(shì)半功倍，雖然說，經過多年的發展，技術已經非常成熟了(le)，但(dàn)是，這(zhè)也(yě)是一個非常依賴經驗的技術。所以，對(duì)于一些(xiē)新手來(lái)說，在重組蛋白(bái)表達過程中，有很(hěn)多需要注意的問題。有鑒于此，普健生物在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家具體聊聊有關重組蛋白(bái)表達和(hé)純化過程中常常會(huì)遇到(dào)的問題。
1、蛋白(bái)不表達
蛋白(bái)不表達的原因有很(hěn)多，一般來(lái)說，大(dà)部分的都可以通過如下(xià)幾個方面來(lái)判斷。蛋白(bái)大(dà)小(xiǎo)：一般來(lái)說，小(xiǎo)于10kd或大(dà)于100kd的蛋白(bái)都是比較難以表達的;表達菌株與質粒是否配套;表達條件是否合适，比如誘導劑、溫度等;培養基選擇：對(duì)于不同的表達需求，需要搭配不同的培養基選擇;當然了(le)，表達成功與否也(yě)和(hé)表達量太低(dī)或是降解太快(kuài)有關;
2、蛋白(bái)降解
在純化過程中，常常會(huì)因爲蛋白(bái)降解而導緻表達失敗。一般是因爲細菌本身的蛋白(bái)酶所有引起的，所以，需要全程添加蛋白(bái)酶抑制劑;
3、蛋白(bái)純度不高(gāo)
蛋白(bái)純化過程時(shí)并不是每次都完美(měi)洗去雜(zá)質，特别是鎳柱純化，雜(zá)蛋白(bái)較多，需要結合多種純化方式聯用(yòng);
4、條帶與預測不符
蛋白(bái)表達後常常會(huì)以多種狀态存在，因爲電荷分布，會(huì)導緻遷移速率有一定的變化，所以，會(huì)造成條帶偏移，複性後的蛋白(bái)會(huì)存在着大(dà)小(xiǎo)偏移的現(xiàn)象，而且翻譯後修飾也(yě)會(huì)造成條帶大(dà)小(xiǎo)不一;
當然了(le)，重組蛋白(bái)表達過程中會(huì)遇到(dào)的問題有很(hěn)多，無論是誘導溫度、濕度等方面的影響，以及各種抑制劑的添加，控制好(hǎo)細節方面的問題才能(néng)保證蛋白(bái)的表達。在研究過程中遇到(dào)問題，需要進行大(dà)量的排查、試錯，這(zhè)樣才能(néng)在面對(duì)一個全新蛋白(bái)時(shí)，更好(hǎo)地進行控制。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
