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納米抗體是一種從(cóng)駝類動物以及鲨魚等動物體内提取的一種天然缺失輕鏈的抗體，因爲其結構很(hěn)小(xiǎo)，達到(dào)納米級，因此被稱爲納米抗體。納米抗體的可溶性極高(gāo)，而且不易聚集、耐高(gāo)溫、耐強酸強堿等，适用(yòng)于各種原核、真核蛋白(bái)的表達。下(xià)面，普健生物和(hé)大(dà)家具體聊聊有關納米抗體制備的具體過程。
1、目的基因提取
從(cóng)動物體内(駝類動物或鲨魚)提取所需的RNA和(hé)cDNA，通過相關的生物技術手段，将其提取出來(lái)并進行克隆表達;
2、納米抗體基因構建
通過選擇适當的引物，對(duì)VHH基因進行擴增。而後将擴增後的VHH基因克隆到(dào)表達載體(一般包含啓動子、标記基因以及VHH基因等)中;
3、選擇合适的蛋白(bái)表達系統
一般來(lái)說，原核表達與真核表達的選擇是各不相同的。對(duì)于原核表達系統來(lái)說，可以選擇大(dà)腸杆菌表達系統來(lái)表達，而對(duì)于真核表達系統過來(lái)說，可以選擇哺乳動物表達系統來(lái)進行表達;
4、蛋白(bái)表達及優化
通過細胞轉染或細菌感染的方式，将目的基因轉染到(dào)表達載體中，通過對(duì)相關培養條件進行優化(比如溫度、培養基成分、轉染時(shí)間等)，從(cóng)而提升納米抗體的表達概率;
5、細胞培養
通過調控相應的培養條件，對(duì)轉染後的細胞進行培養，使得目的基因随着蛋白(bái)的表達而表達，而後通過相關細胞破碎技術，将蛋白(bái)釋放(fàng)出來(lái)，而後通過離心等方式獲得細胞上(shàng)清液;
6、蛋白(bái)純化
通過親和(hé)層析法(通過特異性靶标結合的特性，使用(yòng)親和(hé)層析柱來(lái)提升其純度)、透析法(在進行親和(hé)層析後，進行透析，去除其中的雜(zá)質)、離心法(利用(yòng)超速離心的方式去除細胞碎片和(hé)大(dà)顆粒物)等方式，提升蛋白(bái)的純度;
7、蛋白(bái)評估
對(duì)蛋白(bái)進行純度、功能(néng)等各方面特性的評估，而後将其進行凍存，以實現(xiàn)其長期保持的穩定性;
以上(shàng)就是納米抗體制備的一般表達過程，當然了(le)，對(duì)于不同的公司來(lái)說，因爲技術、儀器、技術團隊等方面的區(qū)别，其制備過程有着一定不同，但(dàn)是，總體來(lái)說是大(dà)體相同的。而納米抗體制備的具體流程，需要結合目的蛋白(bái)的不同方式來(lái)進行選擇，這(zhè)樣才能(néng)更好(hǎo)地獲得所需蛋白(bái)。更多納米抗體制備的相關知(zhī)識，敬請(qǐng)關注普健生物。
