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采用(yòng)雜(zá)交瘤細胞技術制備單克隆抗體的具體步驟及原理(lǐ)

發表時(shí)間:2024-06-14 訪問次數:90

  雜(zá)交瘤細胞技術是最常用(yòng)于制備單克隆抗體的方式,通過将骨髓瘤細胞與免疫後的B淋巴細胞相融合而形成的細胞。融合形成的這(zhè)個細胞既可以避免B細胞無法無限增殖的缺點,又可以大(dà)量制備所需抗體。也(yě)正因爲這(zhè)個特性,使得其在臨床試驗中得到(dào)了(le)廣泛的應用(yòng)。那麽,雜(zá)交瘤細胞技術的操作(zuò)流程是怎樣的呢(ne)?

雜(zá)交瘤細胞技術

  1、免疫小(xiǎo)鼠。通過抗原提取或定制,得到(dào)純度較高(gāo)的抗原,而後将其注入到(dào)小(xiǎo)鼠體内。當然了(le),爲了(le)免疫成功,間隔一段時(shí)間後再次對(duì)小(xiǎo)鼠進行免疫,多輪免疫後,确保免疫成功;

  2、細胞提取。當小(xiǎo)鼠免疫成功後,提取出脾髒,并将其分離出來(lái);

  3、細胞融合。将小(xiǎo)鼠脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合,形成雜(zá)交瘤細胞;

  4、細胞篩選。将雜(zá)交瘤細胞放(fàng)入培養基中,通過相關技術手段,篩選出合适的雜(zá)交瘤細胞;

  5、細胞擴增。将篩選出的雜(zá)交瘤細胞進行擴增,并收集齊上(shàng)清液;

  6、蛋白(bái)純化。通過親和(hé)層析等技術,對(duì)所得單克隆抗體進行純化;

  7、蛋白(bái)鑒定。通過一些(xiē)手段對(duì)單克隆抗體進行特異性、親和(hé)力等方面特性的鑒定;

  當然了(le),随着相關技術的不斷發展,各種單克隆抗體制備的技術營運而生,如Single B兔單克隆抗體制備等技術。但(dàn)是,其在技術需求方面有着一定的要求,需要結合實際情況來(lái)選擇。

  大(dà)規模單克隆抗體制備的流程是怎樣的?

  對(duì)于大(dà)規模單克隆抗體制備來(lái)說,在主要流程上(shàng)大(dà)體相同,但(dàn)是在一些(xiē)細節方面有着一定的不同。

  1、免疫小(xiǎo)鼠。将抗原注入小(xiǎo)鼠體内,使得其産生免疫反應;

  2、淋巴細胞分離。提取免疫成功後的小(xiǎo)鼠脾細胞;

  3、細胞融合。将脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合;

  4、抗體篩選與鑒定。将雜(zá)交瘤細胞篩選和(hé)鑒定;

  5、抗體生産。對(duì)雜(zá)交瘤細胞進行擴增,大(dà)規模培養,而後實現(xiàn)抗體的大(dà)規模生産;

  相對(duì)其他(tā)抗體制備方式來(lái)說,雜(zá)交瘤細胞技術無論是在制備技術要求上(shàng)還是制備成本上(shàng)都有着極大(dà)的優勢,适用(yòng)于大(dà)部分抗體制備的情況。當然了(le),雜(zá)交瘤技術也(yě)有着一定的局限性,比如操作(zuò)步驟繁瑣、抗體鼠源性等,但(dàn)是,相信随着技術的不斷發展,這(zhè)些(xiē)問題将會(huì)得到(dào)解決。更多有關雜(zá)交瘤技術的相關知(zhī)識,敬請(qǐng)關注普健生物。