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前面我們和(hé)大(dà)家具體介紹過“抗體人源化的分類”，今天，我們在這(zhè)裏具體再和(hé)大(dà)家聊聊有關抗體人源化中的一些(xiē)介紹過程。
抗體人源化作(zuò)爲解決鼠源抗體免疫原性的方式，其制作(zuò)過程雖然說各有不同，但(dàn)是，整體的過程也(yě)是大(dà)緻相同的，但(dàn)是，很(hěn)多人在實驗的過程中，常常會(huì)碰到(dào)一些(xiē)問題，出現(xiàn)實驗結果偏差的現(xiàn)象。其實這(zhè)個問題非常的常見，主要還是因爲我們沒有嚴格地按照順序來(lái)進行。下(xià)面，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊有關抗體人源化的實驗步驟。
1、抗體可變區(qū)/抗體全長測序
通過對(duì)鼠源單克隆抗體細胞系進行可變區(qū)/抗體全長基因序列測序。
2、嵌合抗體表達及抗原抗體結合分析
在過程1的基礎上(shàng)，結合可變區(qū)的序列和(hé)人源恒定區(qū)進行嵌合抗體序列的設計(jì)，然後再通過哺乳系統來(lái)進行嵌合抗體的表達;通過對(duì)嵌合抗體的抗原抗體進行分析，同時(shí)提供樣本進行親和(hé)力檢測。
3、人源化抗體設計(jì)
通過CDR移植、回複突變、生物信息學分析等方法對(duì)抗體的VH和(hé)VL區(qū)域進行人源化設計(jì)。
4、人源化抗體表達
密碼子優化，基因合成，亞克隆，轉染，抗體表達及純化，8-10周。
5、人源化抗體性質檢測
結合力檢測：ELISA/FACS測定EC50值，或Biacore/Octet測定Kd值;人源化抗體體外(wài)生物活性分析并與嵌合抗體進行比較;人源化抗體與同源性物種的交叉反應性分析;人源化抗體生物物理(lǐ)特性分析：SEC-HPLC分析，DS-PAGE分析，DSC分析。
對(duì)于抗體人源化來(lái)說，人源化替換點可以說直接影響到(dào)CDR區(qū)構象的關鍵，所以，需要引起高(gāo)度的重視(shì)。否則，極有可能(néng)體驗“一失足成千古恨”的感覺。普健生物爲廣大(dà)用(yòng)戶提供專業的抗體人源化服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
