SPR親和(hé)力測定

一、概述

　　親和(hé)力是判定分子間相互作(zuò)用(yòng)的重要參數，是了(le)解分子以及藥物的發現(xiàn)與篩選等的重要指标。對(duì)于藥效的評價、生物大(dà)分子及其複合體的穩定性的評估需要從(cóng)動力學、熱力學和(hé)熱穩定性等方面進行：包括分子間的結合、結合的快(kuài)慢、結合的強弱、結合的機理(lǐ)等多方面的全面性研究。

　　普健生物提供的表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)服務能(néng)夠實現(xiàn)對(duì)蛋白(bái)，抗體、多肽、核酸及小(xiǎo)分子化合物等相互作(zuò)用(yòng)的定性定量分析，也(yě)可以對(duì)細胞裂解液、文(wén)庫樣本等依托LSPR-Selex技術垂釣篩選未知(zhī)靶标。

SPR芯片工(gōng)作(zuò)原理(lǐ)示意圖

二、服務内容

三、實驗流程

　　1、按照 OpenSPR^TM 儀器标準操作(zuò)程序安裝 NTA 芯片。

　　2、開(kāi)始以最大(dà)流速(150 µL/min)運行，檢測緩沖液PBS(pH7.4)。

　　3、達到(dào)信号基線後，調整緩沖液的流速到(dào)20 µL/min。

　　4、開(kāi)始激活芯片，取出制備好(hǎo)的咪唑和(hé)NiCl2 溶液，通過進樣口注入，與傳感器相互作(zuò)用(yòng)5min完成芯片表面功能(néng)化，準備配體。

　　5、用(yòng)激活緩沖液稀釋用(yòng)于固定的配體， 體積爲200µL濃度爲10-50µg/mL ，通過進樣口注入相互作(zuò)用(yòng)4 min。

　　6、觀察基線5 min，以确保穩定。

　　7、通過比較注入配體前後的信号測量配體結合的量。如果需要更多的配體，可以再次注入配體。

　　8、配體信号穩定之後，開(kāi)始注入高(gāo)濃度的分析物，以确認配體的活性，并确認表面大(dà)緻的最大(dà)結合能(néng)力。

　　9、将流速提高(gāo)到(dào)150 µL/min，注入适當的再生緩沖液，以去除分析物。

　　10、分析物用(yòng)緩沖液稀釋，濃度詳見實驗結果，并以20 µL/min 上(shàng)樣，蛋白(bái)與配體結合時(shí)間均爲240 s;自(zì)然解離420 s。

　　11、本次實驗結果所使用(yòng)分析軟件爲：TraceDrawer (Ridgeview Instruments ab, Sweden)，分析方法是 One To One 分析模型。

四、結果分析

動力學及親和(hé)力參數

　　結果說明(míng)：靶蛋白(bái)跟 Gidn 的親和(hé)力爲48 nM.

相關服務

　　重組抗體表達   抗體人源化   雙特異性抗體   雜(zá)交瘤測序