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盤點穩定細胞株構建時(shí)的常用(yòng)步驟

發表時(shí)間:2023-07-04 訪問次數:730

  之前我們和(hé)大(dà)家聊過穩定細胞株篩選,其實就是從(cóng)構建的穩定細胞株中挑選出穩定表達且目的蛋白(bái)質量高(gāo)的細胞株。今天,我們再和(hé)大(dà)家具體聊聊有關穩定細胞株構建的常用(yòng)方法。

  總共的來(lái)說,穩定細胞株因爲技術實力、儀器、原材料以及需求不同,其構建方法也(yě)是各不相同的,不過,常用(yòng)的一些(xiē)方法也(yě)大(dà)體相同。

  1. 轉染:這(zhè)是最常用(yòng)的方法之一,通過将目标基因的表達載體導入到(dào)目标細胞中實現(xiàn)。

  轉染的方法一般包括:化學轉染和(hé)病毒轉染兩種。

  化學轉染:使用(yòng)化學物質(例如聚乙烯亞胺、磷脂體等)将表達載體引入細胞内。

  病毒轉染:使用(yòng)病毒作(zuò)爲介導體,将表達載體傳遞到(dào)細胞中。常用(yòng)的病毒載體包括腺病毒、逆轉錄病毒和(hé)腺相關病毒等。

  2.電穿孔:通過電脈沖的作(zuò)用(yòng),在細胞膜上(shàng)形成臨時(shí)的微孔,使表達載體得以進入細胞。這(zhè)種方法可以在不使用(yòng)病毒或化學物質的情況下(xià)實現(xiàn)轉染。

  3.瞬時(shí)轉染:這(zhè)種方法不涉及穩定細胞株的構建,而是将目标基因的表達載體短暫地導入細胞中,使其在一段時(shí)間内表達目标基因或蛋白(bái)質。這(zhè)可以用(yòng)于快(kuài)速評估目标基因的功能(néng)或進行臨時(shí)的表達實驗。

  在進行穩定細胞株構建時(shí),我們常常會(huì)進行相關的标記,以便于在轉染後期進行相關的篩選工(gōng)作(zuò),這(zhè)樣,就能(néng)夠更加精确地讓我們獲得穩定細胞株。而且作(zuò)爲現(xiàn)階段使用(yòng)相對(duì)廣泛的一種蛋白(bái)表達技術,穩定細胞株的重要性是不言而喻的,而且随着技術的不斷發展,相信在不僅的将來(lái),其使用(yòng)将會(huì)更加的廣泛。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供穩定細胞株構建服務,如果您有相關需求,歡迎來(lái)電咨詢。