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單克隆抗體制備後，我們都需要對(duì)所得抗體進行相應的純化工(gōng)作(zuò)，隻有提純，才能(néng)讓減少抗體的雜(zá)質，并提升抗體的作(zuò)用(yòng)效果。可以說，抗體純化是抗體必不可少的過程。那麽，您知(zhī)道(dào)怎麽做抗體純化嗎?抗體純化的具體操作(zuò)步驟是怎樣的?今天普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。
我們知(zhī)道(dào)，抗體主要來(lái)源于血清，通過反複想動物體内注入抗原産生。然後，對(duì)血清進行相關抗體的提取，這(zhè)個過程就是抗體純化。
抗體純化的原理(lǐ)：
抗體純化的原理(lǐ)主要是根據蛋白(bái)的一些(xiē)性質不同，将其從(cóng)混合液中提取出來(lái)的方式。比如利用(yòng)蛋白(bái)分子大(dà)小(xiǎo)不同、PH溶解值不同、溶解度不同、吸附性質不同、生物親和(hé)力不同等一系列的手段，将其從(cóng)溶液中提取出來(lái)的方式。
抗體純化的具體步驟：
1、蛋白(bái)提取
通過手段破碎細胞，使得蛋白(bái)得以釋放(fàng)出來(lái)。通常利用(yòng)裂解緩沖液破碎細胞，而後通過離心等方法去除細胞碎片，再将蛋白(bái)從(cóng)裂解液中溶解出來(lái);
2、抗體富集
通過層析的方式，使得抗體更集中。常見的方法有親和(hé)層析(利用(yòng)抗體及其特異性之間的特異性結合)、離子交換層析(利用(yòng)抗體與離子交換介質之間的電荷相互作(zuò)用(yòng)來(lái)實現(xiàn)富集)、尺寸排除層析(根據分子大(dà)小(xiǎo)差異，利用(yòng)多孔介質篩選);
3、純化和(hé)濃縮
通過透析膜将富集的抗體從(cóng)介質中洗脫出來(lái)，并去除鹽離子等小(xiǎo)分子雜(zá)質，之後在利用(yòng)濃縮裝置，将目标抗體濃縮到(dào)較小(xiǎo)的體積;
4、純化驗證
通過SDS-PAGE、Western blot等手段，驗證抗體的分子量以及特異性結合的能(néng)力;
總的來(lái)說，抗體純化是一個非常複雜(zá)的過程，我們需要結合抗體的具體情況選擇具體的純化方法，這(zhè)樣不僅能(néng)節約大(dà)量的時(shí)間，而且能(néng)夠有效降低(dī)其成本投入。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供單克隆抗體純化服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
