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在我們進行相應的蛋白(bái)制備工(gōng)作(zuò)時(shí)，表達成功可以說是至關重要的，但(dàn)是一些(xiē)細節方面的工(gōng)作(zuò)如果做得好(hǎo)的話(huà)，下(xià)遊實驗中應用(yòng)起來(lái)會(huì)變得更方便。不僅僅能(néng)提升蛋白(bái)的水(shuǐ)溶性，而且可以在極大(dà)程度上(shàng)節約時(shí)間。具體操作(zuò)，普健生物在下(xià)面和(hé)大(dà)家一一道(dào)來(lái)。
選擇正确的标簽可以說是一項艱巨的任務，因爲合适的标簽不僅能(néng)幫我們獲得可溶性蛋白(bái)，而且能(néng)夠方便我們純化的方案，且不會(huì)對(duì)後續的實驗造成影響。在這(zhè)裏，我們唯一需要擔心的事(shì)情就是那個标簽有助于目标蛋白(bái)的溶解、表達及純化，因爲标簽本身是可以切除的，所以，不用(yòng)擔心它會(huì)幹擾到(dào)蛋白(bái)。
硬性蛋白(bái)可溶性的三個關鍵參數：
IPTG濃度
在不同濃度下(xià)，蛋白(bái)的特性是不一樣的。但(dàn)是我們需要注意，不要改變細胞中蛋白(bái)的折疊功能(néng)。在日常實驗中，我們可以考慮多嘗試幾個不同的濃度，選擇一個最高(gāo)可溶性蛋白(bái)的産量;
溫度
偶爾我們在37度的典型溫度下(xià)，通過生長和(hé)誘導分離的方式來(lái)分離蛋白(bái)。當然了(le)，我們也(yě)可以試試在較低(dī)溫度下(xià)進行增強，比如嘗試30度、25度、18度等溫度下(xià)進行誘導;
誘導時(shí)間
誘導時(shí)間并不是說越長越好(hǎo)，因爲宿主細胞會(huì)對(duì)蛋白(bái)會(huì)造成一定的降解，毒蛋白(bái)更甚。所以，在誘導期間，我們需要隔幾個小(xiǎo)時(shí)進行取樣，并檢測蛋白(bái)的表達情況。一般來(lái)說，37度時(shí)4小(xiǎo)時(shí)最佳，30度5-6小(xiǎo)時(shí)最佳，25度情況下(xià)可以允許過夜;
當然了(le)，在正式投入使用(yòng)之前，我們可以對(duì)其進行預實驗，通過各種不同的實驗進行測試，選擇一種最合适的方式來(lái)投入到(dào)後期的實驗中。當各種方法都無法達到(dào)預期時(shí)，我們可以考慮隻表達一部分蛋白(bái)，或者選擇不同的表達系統來(lái)進行表達，最後甚至可以考慮采用(yòng)調整各種變性條件下(xià)的純化。總之，無論用(yòng)什(shén)麽辦法，達到(dào)自(zì)己的要求即可。更多蛋白(bái)表達方面的知(zhī)識，敬請(qǐng)關注普健生物。
