聯系我們
關于重組蛋白(bái)，相信一些(xiē)有一點技術的公司都可以做表達出來(lái)，但(dàn)是，如果想要将蛋白(bái)用(yòng)于下(xià)遊實驗，那麽，成功表達的重組蛋白(bái)就顯得非常的重要了(le)。蛋白(bái)并不是說表達出來(lái)就行，而是需要爲後續的實驗提供有效助力，如果在一開(kāi)始的時(shí)候就優化了(le)蛋白(bái)的可溶性，那麽，後續的實驗将會(huì)得到(dào)極大(dà)的簡化。因此，爲重組蛋白(bái)選擇一款正确的标簽就顯得非常重要了(le)。
常用(yòng)的标簽中都有什(shén)麽?
很(hěn)多人對(duì)于“正确”這(zhè)個詞有着一定的誤解，隻是覺得挑選一個标簽讓蛋白(bái)得以表達即可。其實不然，所選的标簽需要幫助我們獲得可溶性蛋白(bái)，不僅簡化相應的蛋白(bái)純化方案，更是不會(huì)對(duì)後續實驗産生影響，甚至起到(dào)促進作(zuò)用(yòng)。所以，對(duì)于那些(xiē)具備多個切割位點的蛋白(bái)來(lái)說，我們需要考慮的問題就是蛋白(bái)的溶解、表達以及純化點是否可以切除，以及切除這(zhè)個點是否會(huì)影響到(dào)後續目的蛋白(bái)的行爲。
如何獲得可溶性蛋白(bái)?
對(duì)于重組蛋白(bái)來(lái)說，它在真核細菌中表達時(shí)，最常見的問題就是不溶。所以，想要使得其可溶性提升，需要結合如下(xià)三個方面來(lái)進行考慮。
1、IPTG濃度
簡單來(lái)說，就是控制好(hǎo)IPTG的濃度，可以嘗試多幾個不同的濃度，選擇一下(xià)，看(kàn)哪個濃度能(néng)夠提供最高(gāo)的可溶性蛋白(bái)濃度;
2、溫度
首先，我們選擇37度的典型溫度來(lái)進行生長和(hé)誘導分離，一般來(lái)說，在更低(dī)的溫度下(xià)蛋白(bái)的表達程度更高(gāo)。然後，我們可以分别嘗試在30度、25度、18度等條件下(xià)進行誘導，選擇最佳誘導溫度後，再加入IPTG;
3、誘導時(shí)間
當然了(le)，誘導的時(shí)間并非越長越好(hǎo)，對(duì)于那些(xiē)“有毒蛋白(bái)”顯得尤爲明(míng)顯。一般來(lái)說，我們在誘導時(shí)，選擇隔幾個小(xiǎo)時(shí)取一次樣，并檢查目的蛋白(bái)的表達量;
當然了(le)，如果通過如上(shàng)這(zhè)些(xiē)手段都沒有達到(dào)我們的要求，那麽，我們可以考慮通過隻表達蛋白(bái)的一部分，或者選擇不同的表達系統來(lái)進行表達，甚至保留目的蛋白(bái)的翻譯後修飾。總的來(lái)說，通過多次的實驗總會(huì)獲得我們所需的重組蛋白(bái)。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
