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在重組蛋白(bái)表達中，很(hěn)多時(shí)候會(huì)出現(xiàn)因爲一些(xiē)原因或是誤操作(zuò)導緻蛋白(bái)表達失敗或蛋白(bái)性能(néng)達不到(dào)要求的情況。很(hěn)多時(shí)候是因爲一些(xiē)細節操作(zuò)方面的問題，有些(xiē)時(shí)候是因爲重組蛋白(bái)設計(jì)方面的問題，那麽，到(dào)底是因爲什(shén)麽原因導緻呢(ne)?有鑒于此，普健生物今天在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家具體盤點一下(xià)有關重組蛋白(bái)表達過程中的一些(xiē)常見問題。
1、蛋白(bái)表達水(shuǐ)平低(dī)
重組蛋白(bái)表達水(shuǐ)平低(dī)可以說是重組蛋白(bái)系列中最常見的一個問題，因爲蛋白(bái)人爲幹預程度較高(gāo)，無法完全按照傳統蛋白(bái)表達條件進行表達。引起這(zhè)個情況的原因很(hěn)多，比如啓動子活性不足、轉錄過程阻塞、翻譯後修飾限制多等等。需要通過優化啓動子、培養條件、轉化條件、培養時(shí)間等多方面進行綜合考慮;
2、目的蛋白(bái)形成包涵體
非天然蛋白(bái)會(huì)出現(xiàn)包涵體的情況也(yě)是重組蛋白(bái)表達過程中非常常見的問題。當形成包涵體時(shí)，我們可以通過優化培養條件、引入輔助蛋白(bái)等方式來(lái)解決這(zhè)個問題;
3、目标蛋白(bái)磷酸化或糖基化不足
重組蛋白(bái)在表達後常常需要對(duì)其進行翻譯後修飾的操作(zuò)(比如糖基化和(hé)磷酸化)，但(dàn)是有的時(shí)候因爲修飾程度不足，導緻蛋白(bái)在功能(néng)和(hé)穩定性方面受到(dào)影響。我們可以通過優化培養條件、引入合适的修飾基因以及選擇更好(hǎo)的進化系統來(lái)解決問題;
4、目标蛋白(bái)折疊和(hé)穩定性方面的問題
目的蛋白(bái)折疊錯誤很(hěn)容易出現(xiàn)蛋白(bái)失活或不穩定的現(xiàn)象，這(zhè)個時(shí)候我們需要優化載體構建以及純化策略的方式來(lái)解決問題;
5、目标蛋白(bái)可溶性問題
蛋白(bái)不可溶或可溶性低(dī)也(yě)是重組蛋白(bái)表達的常見問題，主要表現(xiàn)在保存時(shí)出現(xiàn)聚集和(hé)結晶方面的問題。我們可以通過優化純化條件、使用(yòng)功能(néng)蛋白(bái)穩定劑以及使蛋白(bái)緩慢結晶的方式來(lái)解決這(zhè)個問題;
重組蛋白(bái)表達在蛋白(bái)功能(néng)研究和(hé)醫(yī)藥生産方面有着重要的意義，但(dàn)是也(yě)因爲其非天然蛋白(bái)的緣故，會(huì)遇到(dào)很(hěn)多傳統蛋白(bái)表達所不會(huì)遇到(dào)的問題，哺乳表達量低(dī)、包涵體形成等。這(zhè)個時(shí)候，我們就需要通過優化各種條件來(lái)滿足其表達的條件，這(zhè)樣才能(néng)獲得質量更好(hǎo)的蛋白(bái)。當然了(le)，各個細節方面的操作(zuò)也(yě)是非常重要的。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
