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質粒轉染，相信大(dà)家都不會(huì)陌生，在我們進行哺乳動物細胞蛋白(bái)表達和(hé)昆蟲細胞表達中都會(huì)用(yòng)到(dào)這(zhè)個過程，可以說轉染的效果直接影響到(dào)我們後期實驗的成敗。今天普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊質粒轉染以及在操作(zuò)過程中需要注意到(dào)的一些(xiē)事(shì)項，以便于大(dà)家更好(hǎo)地進行實驗。
昆蟲細胞擴大(dà)轉染
1、挑選狀态良好(hǎo)的細胞(選取活力在98%以上(shàng)且在生長期内的)，将其放(fàng)置于細胞培養的六孔闆上(shàng)，平均90萬/空(kōng)孔;
2、将細胞房在29度的培養皿上(shàng)靜置半小(xiǎo)時(shí)，在細胞完全貼壁後再進行轉染;
3、轉染;
4、轉染體系之後，再将其放(fàng)置在室溫下(xià)培養半小(xiǎo)時(shí)以上(shàng);
5、孵育完成之後，再将其滴加到(dào)準備好(hǎo)的6孔闆中;
6、在六孔闆内培養4-6天後，取其上(shàng)清液即可得P1代病毒;
轉染過程中需要注意哪些(xiē)事(shì)項?
1、細胞的密度
一般保持細胞密度在70%-90%時(shí)進行轉染最好(hǎo)，過高(gāo)或過低(dī)都會(huì)對(duì)轉染的效果造成影響(細胞鋪闆和(hé)轉染最好(hǎo)當天進行);
2、細胞的狀态
盡量選擇适度傳代的細胞，而且不同批次的實驗也(yě)盡量選擇相同傳代次數的細胞。而且細胞盡量保持均勻且密度一緻，盡量确保不要選擇被支原體污染的細胞;
3、細胞種類的選擇
不同的細胞在做轉染是所需要的體系是各不相同的，如果我們在一種體系上(shàng)使用(yòng)不同的細胞，納米，其所得的結果是各不相同的。所以，同一種體系，盡量用(yòng)同一種細胞;
4、轉染試劑選擇
試劑的選擇一般我們都要遵循高(gāo)效、方便、低(dī)價、低(dī)毒，一般來(lái)說，每種轉染試劑都有相應的成功文(wén)獻，我們完全可以按照那個來(lái)選擇;
質粒轉染雖然是基礎性的實驗，但(dàn)是，它卻制約着我們的實驗是否成功的關鍵，所以，還是要花(huā)費不少心思的。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供哺乳動物細胞表達以及昆蟲細胞表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
