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在我們的細胞中，蛋白(bái)的生成和(hé)降解處于一種平衡的狀态，這(zhè)也(yě)保證了(le)細胞處于一種平衡狀态。如果想要細胞更高(gāo)效的生成蛋白(bái)，我們就必須了(le)解蛋白(bái)的半衰期。
其實我一直很(hěn)好(hǎo)奇，細胞爲什(shén)麽要降解掉它辛辛苦苦生成出來(lái)的蛋白(bái)呢(ne)?其實，它的主要目的是清除其中已經完成工(gōng)作(zuò)的蛋白(bái)，避免因爲某種蛋白(bái)的作(zuò)用(yòng)而造成不良的影響。那麽，蛋白(bái)的穩定性就成爲制約我們生産蛋白(bái)的主要因素。如何檢測所表達重組蛋白(bái)的穩定性呢(ne)?今天普健生物就和(hé)大(dà)家具體介紹幾種方法。
1、脈沖追蹤
這(zhè)是一種傳統追蹤蛋白(bái)并估算(suàn)其穩定性的方法，需要處理(lǐ)放(fàng)射性。通常我們會(huì)在短時(shí)間内放(fàng)射性标記細胞，然後再蛋白(bái)動力學過程中添加未标記的前體。随着舊蛋白(bái)的降解新蛋白(bái)被合成的同時(shí)，我們檢測樣品中的放(fàng)射性，以此來(lái)确定蛋白(bái)的半衰期;
2、環己酰亞胺追蹤
這(zhè)個方法相對(duì)脈沖追蹤要簡單一些(xiē)，不用(yòng)脈沖追蹤和(hé)放(fàng)射性使用(yòng)，而是改爲添加一種環己酰亞胺來(lái)一直蛋白(bái)的合成，而後再來(lái)評估目的蛋白(bái)随時(shí)間的降解情況;
3、抑制劑使用(yòng)
我們知(zhī)道(dào)，細胞内蛋白(bái)降解主要有兩種途徑：蛋白(bái)酶體途徑和(hé)溶酶體途徑。通過一系列酶，将蛋白(bái)用(yòng)泛素标記，讓其最終定向稱爲細胞蛋白(bái)酶複合體，然後我們通過觀察其降解情況來(lái)測定蛋白(bái)的半衰期。而溶酶體途徑則是通過藥物抑制蛋白(bái)酶複合體，然後再評估這(zhè)種幹預對(duì)蛋白(bái)表達的影響;
4、相關翻譯後修飾蛋白(bái)降解法
這(zhè)個方法需要對(duì)了(le)解目的蛋白(bái)的降解途徑，然後分析其标簽，看(kàn)哪些(xiē)标簽是必須的。而後，通過對(duì)标簽的觀察來(lái)查看(kàn)蛋白(bái)的半衰期;
5、蛋白(bái)的泛素化動力學
前面我們和(hé)大(dà)家聊過有關泛素化方面的知(zhī)識，有需要可以通過“個性化修飾性抗體技術解讀之泛素化抗體”。檢測泛素化可以提供一個強有力的數據，目的蛋白(bái)很(hěn)有可能(néng)稱爲蛋白(bái)酶體的靶點。然後用(yòng)抗泛素蛋白(bái)抗體來(lái)評估其泛素化狀态;
總的來(lái)說，确定蛋白(bái)的半衰期的方法有很(hěn)多，我們完全可以結合自(zì)身的需求以及實際情況來(lái)選最合适的方法。普健生物作(zuò)爲一家擁有15年蛋白(bái)抗體生産經驗的企業，專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供單邊抗體制備服務，如果您有蛋白(bái)表達、抗體定制、抗體測序、抗體人源化等需求，歡迎來(lái)電咨詢。
