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畢赤酵母表達是原核表達中最常用(yòng)的方法之一，因爲其遺傳背景清晰、表達安全、制備成本低(dī)等優點，使得在很(hěn)多項目上(shàng)都會(huì)優先考慮。但(dàn)是，如何讓這(zhè)些(xiē)耗材産生最大(dà)價值，那就是我們保存和(hé)培養的問題了(le)。爲什(shén)麽大(dà)公司在成本上(shàng)要比小(xiǎo)公司更低(dī)?因除了(le)因爲技術和(hé)儀器方面的原因外(wài)，對(duì)耗材的保存和(hé)培養也(yě)是很(hěn)大(dà)的一個方面。
1、計(jì)算(suàn)好(hǎo)酵母的倍增時(shí)間
據生物學統計(jì)，酵母的生長分裂會(huì)随着一定的曲線來(lái)變化，通常一OD值來(lái)繪制。一般來(lái)說，酵母分裂曲線主要分爲三個時(shí)期：延滞期、對(duì)數生長期以及穩定期，在對(duì)數期時(shí)，細胞分裂旺盛且細胞數目倍增。這(zhè)個時(shí)候，我們需要主要補充營養，一旦營養耗盡，細胞分裂減緩，則會(huì)進入穩定期。所以，了(le)解本增時(shí)間，能(néng)夠很(hěn)好(hǎo)地讓我們安排實驗進程;
2、制備培養基
了(le)解好(hǎo)OD圖後，我們就需要進行酵母菌的培養工(gōng)作(zuò)了(le)。酵母的主要糧食是：酵母提取物(去除細胞壁的細胞成分)、蛋白(bái)胨以及糖分。培養基則是将酵母提取物和(hé)蛋白(bái)胨溶解于水(shuǐ)中之後，通過高(gāo)壓滅菌後，倒入到(dào)平闆中，凝固後即是我們所需的培養基;
3、酵母的培養
将酵母細胞種到(dào)小(xiǎo)體積的培養基中，并在30度的搖床或旋轉器上(shàng)培養48小(xiǎo)時(shí)。當然了(le)，對(duì)于大(dà)規模培養如上(shàng)的方式就不适合了(le)，需要先确定酵母培養物的OD值，然後将其稀釋到(dào)起始OD值的0.1-0.2倍，然後再放(fàng)到(dào)30度搖床上(shàng)培養到(dào)所要的OD值;
4、酵母的存儲
平闆培養可将培養基放(fàng)置于4度環境下(xià)保存3個月，如果要得到(dào)新鮮培養物，則需要在新鮮培養基上(shàng)重新規劃細胞。對(duì)于需要長期保存的酵母菌來(lái)說，可将其分别培養在不同的甘油管中，冷凍保存。一般來(lái)說，-80度環境下(xià)可以保存幾年;
酵母的健康可以或直接關系到(dào)我們後期實驗的結果，以及能(néng)否表達出我們想要的蛋白(bái)産品。如果這(zhè)些(xiē)工(gōng)作(zuò)做好(hǎo)了(le)，不僅能(néng)更好(hǎo)地滿足我們的實驗需求，而且能(néng)夠在極大(dà)程度上(shàng)降低(dī)實驗成本。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供酵母蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
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