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原核蛋白(bái)表達是現(xiàn)階段較爲常用(yòng)的蛋白(bái)表達方式之一，因爲其遺傳背景清晰、細胞增殖快(kuài)、蛋白(bái)表達量高(gāo)、穩定性好(hǎo)等特點，使得其在蛋白(bái)表達中極爲常用(yòng)。但(dàn)是，很(hěn)多人在采用(yòng)原核蛋白(bái)棒表達的時(shí)候，常常會(huì)出現(xiàn)蛋白(bái)無法表達的情況。有鑒于此，普健生物在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家聊聊有關原核蛋白(bái)表達中常見的幾大(dà)問題。
1、不知(zhī)道(dào)蛋白(bái)的特性及其結構
當我們不知(zhī)道(dào)蛋白(bái)結構和(hé)特性的時(shí)候，我們可以先确定一下(xià)這(zhè)個蛋白(bái)是否有人研究過，是不是新發現(xiàn)的蛋白(bái)。如果有人研究過，則可以直接查詢相關文(wén)獻，而後采用(yòng)軟件來(lái)測序。如果沒人研究過，則可以考慮先測試部分氨基酸，而後再設計(jì)引物克隆;
2、如何選擇宿主菌
原核表達系統和(hé)真核表達系統的密碼子偏愛性不同，所以，不能(néng)直接用(yòng)真核表達的密碼子。如果蛋白(bái)不表達，則可能(néng)是因爲蛋白(bái)爲毒蛋白(bái)，或序列中有稀有密碼子;
3、測序正确但(dàn)是蛋白(bái)無法表達
解析一下(xià)稀有密碼子，如果較多，則需要采取其他(tā)辦法。也(yě)可能(néng)是基因本身的問題，或者表達量過低(dī)的情況;
4、細胞爲什(shén)麽會(huì)停止生長
通常情況下(xià)，如果細胞停止生長，那麽可能(néng)就會(huì)造成克隆能(néng)力大(dà)大(dà)降低(dī)，但(dàn)是卻不會(huì)死亡。我們可以用(yòng)菌落的形成來(lái)檢測表達系統的性能(néng);
5、表達量和(hé)可溶性低(dī)的原因
一般來(lái)說，原核表達和(hé)可溶性的不同和(hé)很(hěn)多方面有着關系，比如蛋白(bái)合成速率、密碼子優化、表達溫度以及誘導條件優化等，隻有做好(hǎo)這(zhè)些(xiē)方面的工(gōng)作(zuò)，才能(néng)更好(hǎo)的促進蛋白(bái)的表達和(hé)可溶性;
當然了(le)，在原核蛋白(bái)表達過程中可能(néng)會(huì)遇到(dào)各種各樣的問題，相對(duì)來(lái)說，都是因爲日常操作(zuò)中的一些(xiē)細節操作(zuò)方面的問題，一般隻要注意到(dào)了(le)，問題都不會(huì)很(hěn)大(dà)。而且在原核表達中控制好(hǎo)相應的外(wài)部環境問題，能(néng)夠在更大(dà)程度上(shàng)保證蛋白(bái)的表達。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
